• 易锦生物提供的所有人、小鼠和大鼠ORF 克隆及其慢病毒、AAV 颗粒与重组蛋白均使用基于毛细管电泳的 Sanger 法“金标准”全长测序,保证氨基酸序列与NCBI 数据库一致。
    All human and mice ORF clones and related Lentivirus, AAV particles and recombinant proteins provided by iGeneBio are fully sequenced using Sanger sequencing by capillary electrophoresis and Amino Acid Sequences are guaranteed to be matched with NCBI database.
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miRNA 3′ UTR 克隆

产品介绍
GeneCopoeia提供哺乳动物表达载体的人、小鼠、大鼠miRNA 3′ UTR克隆,可用于miRNA靶标验证、预测靶标的功能确证和miRNA对靶标的调控作用的研究。

本公司提供两套3’UTR报告载体。在pEZX-MT05载体中,我们将3’UTR序列(来源于公开的基因序列数据库)插入到Gaussia荧光素酶报告基因下游,在哺乳动物细胞中由SV40启动子驱动转录生成Gaussia荧光素酶(Gluc)和3’UTR靶标序列的嵌合mRNA,因此无需裂解细胞实时监测Gluc的表达,研究mRNA-miRNA的相互作用。在相同载体(pEZX-MT05)上带有分泌型碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。CMV启动子驱动转录的SEAP作为同质粒内的对照,这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。

pEZX-MT06是Firefly/Renilla双荧光素酶报告载体。3’UTR序列在Firefly(hLuc)荧光素酶报告基因下游,CMV启动子驱动转录的Renilla(hRLuc)作为同质粒内的对照。通过裂解细胞检测hLuc和hRLuc的表达。

mirna target with luciferase reporter

            图1. miRNA 3′ UTR克隆载体骨架

图2. 靶标序列(3′ UTR)表达克隆中miRNA的抑制作用

已知LIN28基因是miR-125a的靶标。HEK 293细胞转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆(左)或者共转染miR-125a前体miRNA表达克隆(右)。转染24小时后检测GLuc 和内参SEAP活性。仅转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆的细胞中Gluc和SEAP活性之比定为1(左),以此确定共转样本中的比值。如图所示,miR-125a抑制了GLuc-LIN28-3′-UTR克隆中Gluc 70%以上的活性。

优势

可进行活细胞分析

  • 分泌型GLuc报告基因
  • 无需裂解细胞
  • 节省时间和样本,减少突变,简化试验流程

双报告载体系统

  • 可以对多样本常规转染进行精确比较

高通量兼容

  • 多个样本可同时分析

高灵敏度

  • GLuc比萤火虫或Renilla荧光素酶灵敏度高1000倍

使用方便

  • 所有靶标(3′ UTR)克隆均可用于即时转染
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技术电话

020-32068595
4006020200

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