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影响转染试剂转染效率的因素都有哪些

  转染技术是指将DNA和RNA等外来分子引入真核细胞的技术。它是研究基因表达调控和突变分析的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。下面介绍影响转染试剂转染效率的因素,供大家参考。

  转染效率受许多因素影响,主要因素如下:

  细胞培养

  健康的细胞培养是成功转染的基础。不同的细胞具有不同的培养基,血清和补充剂。低细胞数(<50)可以确保基因型保持不变。

  2.血清

  大多数培养基在使用前都需要血清。经常使用胎牛血清(FCS),使用马或牛血清。通常,血清是包含生长因子和其他辅助因子的不精确成分的添加剂,并且对不同细胞的生长具有非常不同的影响。血清质量的变化直接影响转染效率。因此,建议在转染之前进行测试(向右转)以测试出对细胞生长有益的血清批号。转染过程中使用相同批号的血清,并进行阴性对照(不含转染试剂和外源DNA)以测试细胞。增长是否正常。在存在血清的情况下,某些转染技术(例如脂质体转染)效率非常低,因此在转染前必须去除血清。但是,一些对此敏感的细胞(例如原代细胞)将被损坏甚至死亡,从而导致非常低的转染效率。

  3.向量构造

  转染载体(病毒载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)的构建也会影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞具有较高的感染效率,但是不同的病毒载体具有其特定宿主,并且某些需要特定的细胞周期。例如,逆转录病毒需要在分裂过程中感染宿主细胞,并且需要考虑一些安全问题。 如果基因产物对细胞有毒性作用,转染也很难进行,因此选择与组成或可控制性和适当强度相称的启动子很重要。同时,用空载体和其他基因的相同载体构建的阳性转染对照可以消除毒性干扰。

  4. DNA质量

  DNA质量对转染效率有很大影响。常规转染技术(例如脂质体)基于电荷吸引原理。如果DNA不是纯净的,例如带有少量盐离子,蛋白质和代谢产物污染,它将显着影响转染复合物和转染的有效形成。由德国QIAGEN公司提供的超纯质粒提取试剂盒,是世界上核酸纯化的品牌,可实现两倍于2x CsCl梯度离心的纯度,因此您不必担心DNA的质量。此外,对于某些对内毒素敏感的细胞(例如原代细胞,悬浮细胞和造血细胞),QIAGEN还提供了一种质粒提取试剂盒,可以去除内毒素污染,从而在质粒提取过程中有效去除脂多糖分子,从而确保理想的转染效果。

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