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简述多胜肽转染试剂的操作流程是怎样的

  本公司率先推出的第四代转染试剂GenoFect,是一种以生物大分子为主的组合配方,该类物质介导的siRNA细胞转染,是目前非病毒转染方法中转染效率非常高、细胞毒性非常小和不需要优化转染条件的方法。GenoFect使用省心便捷,转染效率可靠(>90%),毫无细胞毒性,不影响沉默效率并兼有广谱和特异的转染特性。经多个专门实验室使用,获得了满意而优异的效果。

  一、 转染试剂的分装和储藏

  (1)如将500 ul的转染试剂分装到5个无菌去核酸酶小管中。

  (2)将分装试剂放在—80或—20摄氏度保存,使用前需充分溶解震荡,使用后保存在40C或—20摄氏度。

  二、 准备待转染的细胞

  (1)试验准备:20ul/200ul/1mlTip头各一盒(均需高压灭菌),酒精棉球,废液缸,试管架,微量移液器,记号笔,培养皿,离心管。

  (2)弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。

  (3)用Tip头加入1ml 2.5% Trypsin液,消化1分钟 左右(370C,5%CO2 )。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。

  (4)加入1ml的含血清培养基终止反应。

  (5)用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。

  (6)将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。

  (7)用培养液重悬细胞,细胞计数后选择2 — 5 X 105个细胞(视细胞大小而异)加入一个35mm培养皿。

  (8)将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。

  (9)将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。

  三、 进行细胞转染

  (1)选择合适的混合比例: 1:1/转染试剂体积 (μl):siRNA质量(μg)或单链的RNA/DNA来转染细胞。

  稀释小RNA/DNA:对于每孔细胞,用50ul DEPC水稀释1μg小RNA,然后小心混匀。

  稀释GenoFect:对于每孔细胞,用50ul Optimem稀释1μl GenoFect,然后小心混匀。

  (2)制备Genofect/小RNA复合物:将50ul的GenoFect溶液加入50ul小RNA溶液中,立即混匀。室温下孵育15-20min。

  (3)吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。

  (4)加入混合液,将细胞放回培养箱中培养6-8个小时。

  (5)到时后,加入合适体积的完全培养基继续培养24-48小时。

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