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转染试剂的转染方法及原理应用

  转染技术是指将外源分子如 DNA、RNA 等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。以下就向大家介绍一些转染的技术要点及市面上主要的转染试剂类型的选择及转染方法、原理及应用:

  DEAE-右旋糖苷法

  带正电的 DEAE-右旋糖苷与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 瞬时性转染 相对简便、结果可重复但对细胞有一定的毒副作用,转染时需除血清。

  磷酸钙法

  磷酸钙 DNA 复合物吸附细胞膜被细胞内吞 稳定转染,瞬时性转染 不适用于原代细胞,操作简便但重复性差,有些细胞不适用。

  电穿孔法

  高脉冲电压破坏细胞膜电位,DNA 通过膜上形成的小孔导入 稳定转染,瞬时性转染,所有细胞 适用性广但细胞致死率高,DNA 和细胞用量大,需根据不同细胞类型优化电穿孔实验条件。

  阳离子性的脂质体法

  带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞稳定转染。

  瞬时性转染,所有细胞 适用性广,转染效率高,重复性好但转染时需除血清。

  转染效果随细胞类型变化大

  病毒介导法

  逆转录病毒 通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中稳定转染,特定宿主细胞 可用于难转染的细胞、原代细胞,体内细胞等,但携带基因不能太大

  细胞需处分裂期,需考虑安全因素 ,腺病毒 瞬时转染,特定宿主细胞 可用于难转染的细胞,需考虑安全因素。

  Biolistic 颗粒传递法

  将 DNA 用显微重金属颗粒沉淀,再将包被好的颗粒用弹道装置投射入细胞,DNA 在胞内逐步释放,表达瞬时性转染 可用于:人的表皮细胞,纤维原细胞,淋巴细胞系以及原代细胞。

  显微注射法

  用显微操作将 DNA 直接注入靶细胞核 稳定转染,瞬时性转染 转染细胞数有限,多用于工程改造或转基因动物的胚胎细胞

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