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Lipofectamine 2000转染试剂的转染步骤

  转染试剂是研究基因表达调控和突变分析的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。不同的转染试剂的实验转染步骤都是不同的。今天我们先给大家介绍一下Lipofectamine 2000转染试剂的具体转染步骤(24孔板)。

  Lipofectamine 2000转染试剂的转染步骤(24孔板):

  1.转染前一天,胰蛋白酶消化细胞并计数(0.5-2×105),铺板细胞,使转染当天的密度为90-95%。

  2.对于每个孔,使用50 ul无血清培养基稀释0.8-1.0 ugDNA并轻轻混合。

  3.使用前,轻轻混合Lipofectamine 2000转染试剂。用50ul无血清培养基(例如OPTI-MEM I培养基)稀释1-3ul Lipofectamine 2000转染试剂,并轻轻混合。用Lipofectamine 2000稀释后,在5分钟内(<30分钟)与稀释的DNA混合。

  4.混合稀释的DNA(步骤2)和稀释的Lipofectamine 2000(步骤3)。在室温下放置20分钟。

  5.(可选)从24孔板中吸出旧的营养液,并用无血清培养基洗涤两次。加入0.5ml无血清培养基。

  6.将复合物直接添加到每个孔中,摇动培养板,并轻轻混合。

  7.在5%CO2中于37°C孵育24-48小时。无需删除复合体或更改介质。

  8.将复合物添加到细胞中后24-72小时,分析细胞提取物或进行原位细胞染色以检测报告基因的活性。这取决于细胞类型和启动子活性。稳定表达需要几天或几周的时间。

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