• 易锦生物提供的所有人、小鼠和大鼠ORF 克隆及其慢病毒、AAV 颗粒与重组蛋白均使用基于毛细管电泳的 Sanger 法“金标准”全长测序,保证氨基酸序列与NCBI 数据库一致。
    All human and mice ORF clones and related Lentivirus, AAV particles and recombinant proteins provided by iGeneBio are fully sequenced using Sanger sequencing by capillary electrophoresis and Amino Acid Sequences are guaranteed to be matched with NCBI database.
您的位置 首頁 产品 miRNA完整解决方案 miArrest™ miRNA抑制剂

miArrest™ miRNA抑制剂

产品介绍
miRNA抑制剂可以特异、高效地抑制生物体内源性miRNA的活性,是研究miRNA功能缺失的重要工具。GeneCopoeia提供慢病毒或非病毒载体的miArrest™ miRNA抑制剂表达克隆和化学合成的miRNA抑制剂。
miArrest™ miRNA抑制剂克隆可以特异性地结合目的miRNA,瞬时和稳定地抑制miRNA的功能,采用H1或者U6启动子驱动转录可以保证在大多数哺乳动物细胞中高水平表达。

优势

覆盖面广

  • 针对所有已知的人、小鼠和大鼠miRNA

灵活的载体选择

  • 慢病毒载体可转导普通细胞和难转染、未分化细胞
  • 非病毒载体可进行稳定或瞬时转导

先进可靠的设计

  • 表达框经过专利算法设计并经过严格的实验验证

抑制性能优越

  • 与其他化学合成的miRNA抑制剂相比具有更强、更持久的抑制作用和极低的细胞毒性(参照表1
  • 采用H1或U6启动子保证在大多数哺乳动物细胞中高水平表达

高通量兼容

  • 快速简便的实验设计
  • 可同时检测多个样

图1. 不同剂量miArrest™ miRNA抑制剂克隆对靶miRNA抑制作用的对比

HEK293细胞中共转染miR-125a 抑制剂表达质粒 (GeneCopoeia HmiR-AN0094-AM01) 、miR-125a 前体表达质粒(GeneCopoeia HmiR0309-MR03) 和miR-125a的靶标克隆质粒(GeneCopoeia HmiT019205-MT02:将LIN28 的3’UTR克隆到Gaussia荧光素酶-碱性磷酸酶双报告载体)。转染24小时后检测报告基因Gaussia 荧光素酶和参照基因碱性磷酸酶的活性。只转染Gluc-LIN28-3’-UTR质粒的细胞中Gaussia 荧光素酶与碱性磷酸酶活性比值设为1 (左数第一条柱),用来标准化其他细胞样品中的报告基因活性。结果表明miR-125a抑制了Gluc-LIN28-3’-UTR中Gluc 70%以上的活性(左数第二条柱)。这种抑制效应可被导入的不同剂量的miR-125a抑制剂表达质粒特异性的阻遏。转染100 ng 抑制剂表达质粒时,细胞内报告基因/参照基因活性比值(右数第一条)已超出单独转染Gluc-LIN28-3’-UTR报告质粒的对照组。这说明miR-125a抑制剂可以阻遏外源和内源性的miR-125a对靶标基因的抑制,提高GLuc-LIN28-3’-UTR转录本的翻译水平。
基于克隆载体的抑制剂 2′-甲氧修饰的抑制剂 化学合成的LNA抑制剂
抑制效力 +++++ ++ ++
特异性 +++++ +++ +++
稳定性 +++++ + +++
持久性 Long term Transient Transient
细胞毒性 +
导入细胞难易程度 +++++

表1. 基于克隆表达载体的和化学合成的miRNA抑制剂的比较

图2. miRNA抑制剂表达克隆的作用机理

miRNA 抑制剂克隆导入细胞后表达的miRNA抑制剂(miArrest)特异地结合它们的靶miRNA。miRNA抑制剂转录后折叠形成一个稳定的陷阱结构,可以结合两分子靶miRNA。

miArrest™高效、特异地结合细胞内成熟的靶miRNA,阻止了miRNA对靶标mRNA的降解或者翻译抑制,上调miRNA靶标基因的表达。

独特的载体设计确保最大的特异性、抑制强度、抑制作用持久度和最低的脱靶效应。

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