GLuc-ON™ 启动子报告克隆在GLuc报告基因上游插入一段1.2~1.5 kb的序列，这段插入序列与基因转录起始位点（TSS）上游大约1.5kb到下游200bp之间的5'侧翼序列一致，可以通过观察荧光素酶的活性来研究启动子对基因的调节作用。
GeneCopoeia可提供预制和定制的GLuc-ON™ 启动子克隆，包括单报告基因载体系统和双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以Gluc、 mCherry或GFP作为启动子的报告基因；双报告基因载体系统以Gluc作为启动子报告基因，以分泌型碱性磷酸酶 （SEAP）作为信号标准化的内参，可在活细胞中对超过20,000种人和18,000种小鼠启动子进行实时活性分析。
图1. GLuc-ON™ 启动子报告克隆的双报告基因检测原理图。
优势 |
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活细胞分析
- 分泌型Gluc报告子
- 无需裂解细胞
- 节省样本，减少突变，简化试验流程（如脉冲追踪分析等）
实时研究
- 可获得即时检测数据
- 与实时活性分析过程类似
分泌型双报告系统
- 分泌型Gluc和分泌型碱性磷酸酶
- 对多样本常规转染进行精确比较
高通量兼容
- 可用于信号通路研究
- 可进行高通量研究
高灵敏度
- GLuc比萤火虫或Renilla荧光素酶灵敏度高1000倍
使用方便
- 所有启动子报告克隆均可直接用于细胞转染
Gaussia 荧光素酶
GLuc-ON™ 启动子克隆采用经过修饰的GLuc（mGLuc）作为报告基因，能产生强烈且稳定的荧光信号，克服了人野生型GLuc（wtGLuc）信号衰退快的缺点。
图2. mGLuc (蓝色) 和 wtGLuc (红色)的信号稳定性比较。左侧：含有稳定剂的缓冲液；右侧：常规缓冲液。
双报告系统
GLuc-ON™ 启动子克隆可以将分泌型碱性磷酸酶（SEAP）作为第二个报告子和内参。这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。
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图3. 不同启动子在H1B1B和HEK293T细胞中的活性分析。双报告系统启动子克隆和对照以两个重复转染进两种细胞中。转染24小时（(HEK293T）和48小时（H1B1B）后分析样品。NEG（包含非启动子序列）和EMPTY（载体不含启动子）作为阴性对照。 |
载体类型 |
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| 载体 | 报告基因 | 内参基因 | 筛选标记 | 载体类型 |
| pEZX-PG04 | Gaussia luciferase (GLuc) | 分泌型碱性磷酸酶(SEAP) | Puromycin | 非病毒 |
| pEZX-PG02 | Gaussia luciferase (GLuc) | N/A* | Puromycin | 非病毒 |
| pEZX-PF02 | eGFP | N/A* | Puromycin | 非病毒 |
| pEZX-PM02 | mCherry | N/A* | Puromycin | 非病毒 |
| pEZX-LvPG04 | Gaussia luciferase (GLuc) | 分泌型碱性磷酸酶((SEAP) | Puromycin | 慢病毒 |
| pEZX-LvPG02 | Gaussia luciferase (GLuc) | N/A* | Puromycin | 慢病毒 |
| pEZX-LvPF02 | eGFP | N/A* | Puromycin | 慢病毒 |
| pEZX-LvPM02 | mCherry | N/A* | Puromycin | 慢病毒 |
| pEZX-LvPM03 | tdTomato | N/A* | Puromycin | 慢病毒 |
* SEAP可以在分泌型载体中表达。
对照克隆和SEAP表达克隆
Tear Away License
预制的启动子报告克隆GeneCopoeia提供超过20,000种人和18,000种小鼠不同载体的预制启动子报告克隆。
慢病毒载体的启动子报告克隆GeneCopoeia提供客户定制的慢病毒载体启动子报告克隆。 了解慢病毒载体价格信息，请查询。
定制启动子报告克隆 |
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需要定制克隆来比较启动子不同长度或不同区域的功能，请发邮件到 support@igenebio.com 或拨打4006-020-200
| 下载 |
| GLuc-ON™ Promoter Reporter Clones Cancellation, QA, License, and Warranty |
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使用GLuc-ON™ 启动子报告克隆发表的文章
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- Zheng, H. et al. (2013) Glycogen synthase kinase-3 beta regulates Snail and β-catenin expression during Fas-induced epithelial–mesenchymal transition in gastrointestinal cancer. European Journal of Cancer, Available online 9 April 2013. [CDH1 promoter construct].
- Mills, L.D. et al. (2013) Loss of the Transcription Factor GLI1 Identifies a Signaling Network in the Tumor Microenvironment Mediating KRAS-Induced. Journal of Biological Chemistry, March 12, 2013, doi: 10.1074/jbc.M112.438846. [mouse SHH promoter clone].
- Schank, JR. et al (2013) Tacr1 Gene Variation and Neurokinin 1 Receptor Expression Is Associated with Antagonist Efficacy in Genetically Selected Alcohol-Preferring Rats. Biological Psychiatry Journal, PII: S0006-3223(13)00043-7, doi:10.1016/j.biopsych.2012.12.027. [custom Tacr1 promoter luciferase construct].
- Petrella, B. et al. (2012) Interleukin-1 beta and transforming growth factor-beta 3 cooperate to activate matrix metalloproteinase expression and invasiveness in A549 lung adenocarcinoma … Cancer Letters, Volume 325, Issue 2, 28 December 2012, Pages 220–226. [MMP10 promoter clone].