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GLuc-ON™ 启动子报告克隆

产品简介

GLuc-ON™ 启动子报告克隆在GLuc报告基因上游插入一段1.2~1.5 kb的序列,这段插入序列与基因转录起始位点(TSS)上游大约1.5kb到下游200bp之间的5'侧翼序列一致,可以通过观察荧光素酶的活性来研究启动子对基因的调节作用。

GeneCopoeia可提供预制和定制的GLuc-ON™ 启动子克隆,包括单报告基因载体系统和双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以Gluc、mCherry或GFP作为启动子的报告基因;双报告基因载体系统以Gluc作为启动子报告基因,以分泌型碱性磷酸酶 (SEAP)作为信号标准化的内参,可在活细胞中对超过20,000种人和18,000种小鼠启动子进行实时活性分析。

Promoter reporter clones mechanism of action

图1. GLuc-ON™ 启动子报告克隆的双报告基因检测原理图。

 

优势

活细胞分析

  • 分泌型Gluc报告子
  • 无需裂解细胞
  • 节省样本,减少突变,简化试验流程(如脉冲追踪分析等)

实时研究

  • 可获得即时检测数据
  • 与实时活性分析过程类似

分泌型双报告系统

  • 分泌型Gluc和分泌型碱性磷酸酶
  • 对多样本常规转染进行精确比较

高通量兼容

  • 可用于信号通路研究
  • 可进行高通量研究

高灵敏度

  • GLuc比萤火虫或Renilla荧光素酶灵敏度高1000倍

使用方便

  • 所有启动子报告克隆均可直接用于细胞转染

 

Gaussia 荧光素酶

GLuc-ON™ 启动子克隆采用经过修饰的GLuc(mGLuc)作为报告基因,能产生强烈且稳定的荧光信号,克服了人野生型GLuc(wtGLuc)信号衰退快的缺点。

Signal stability of mGluc and wtGlucSignal stability of mGluc and wtGluc

图2. mGLuc (蓝色) 和 wtGLuc (红色)的信号稳定性比较。左侧:含有稳定剂的缓冲液;右侧:常规缓冲液。

 

双报告系统

GLuc-ON™ 启动子克隆可以将分泌型碱性磷酸酶(SEAP)作为第二个报告子和内参。这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。

 

图3. 不同启动子在H1B1B和HEK293T细胞中的活性分析。双报告系统启动子克隆和对照以两个重复转染进两种细胞中。转染24小时((HEK293T)和48小时(H1B1B)后分析样品。NEG(包含非启动子序列)和EMPTY(载体不含启动子)作为阴性对照。