Monthly Archives: 十二月 2020

慢病毒CRISPR/ Cas9的使用介绍

  CRISPR / Cas9慢病毒基因组编辑系统是一种强大的工具,可用于进行遗传筛选,以鉴定涉及哺乳动物细胞各种生物学过程的潜在基因。这种新的反向遗传筛选工具将增强我们在健康和疾病研究中发现和验证靶标的能力,并提供遗传结构和表型之间的重要信息。   通过在各种模型中使用基于基因组的功能丧失筛选,对人类基因组的功能表征研究已经提供了大量信息(1-2)。 RNA干扰(RNAi)已被用作基因组筛选功能丧失的主要方法,但受到可变效率,蛋白质消耗频繁不完全和混淆脱靶效应的限制。CRISPR(聚簇有规律间隔的短回文重复序列)/ Cas9核酸酶介导的基因组工程系统使研究人员能够以更精确的靶向修饰基因组DNA,同时将脱靶效应降至非常低(3-5)。某些......
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FuGENE6转染试剂的转染步骤

  FuGENE6转染试剂在转染前一天将细胞分成培养板,并且在转染当天细胞应达到50-80%汇合。将细胞接种在1-3×105/2 ml的6孔板中,孵育过夜以达到此密度。将FuGENE6转染试剂在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。   1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6,直至总体积到100 ul。   2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液,轻弹管壁混合。   3. 加入1-2 ug的DNA溶液(0.02-2.0 ug/ul),轻弹管壁混合。   4. 室温孵育20分钟。   5. 将6孔板中的旧营养液吸出,加入约1ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次,再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。   6. 将转染复合物加入细胞,混匀使之均......
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简单介绍转染效率的多种影响因素

  转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。以下转染试剂厂家的小编就向大家介绍转染效率的多种影响因素,主要因素有下面几个:   1. 细胞培养物   健康的细胞培养是成功转染的基础。不同的细胞具有不同的培养基,血清和补充剂。细胞产量低(<50)可以保证相同的基因型。高转染效率需要特定的细胞密度,普通转染试剂有特殊说明。建议在转染前24小时分裂细胞。这将导致正常的细胞代谢,并增加外来DNA摄取的可能性。避免被细菌,支原体和真菌污染。   2. 血清   大多数培养基在使用前需要血清。经常使用小牛胎儿血清(FCS)......
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慢病毒载体技术的介绍

  慢病毒载体是基于HIV-1病毒修饰的病毒载体系统,可以有效地将靶基因(或RNAi)引入动物和人的原代细胞和细胞系中。慢病毒载体基因组是一种正链RNA,入侵细胞后,它会通过独特的逆转录酶在细胞质中转化为DNA,形成DNA整合前复合体。入侵细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合的DNA转录mRNA,然后返回细胞质以表达目标蛋白;或产生RNAi干扰。   慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比,比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的......
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介绍下慢病毒Cas9的产品优势与服务特点

  慢病毒Cas9表达体系,该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白,构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系,再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件用于特异性基因敲除。下面介绍下慢病毒Cas9的产品优势与服务特点。   产品优势   a、实验方案设计更灵活。由于不必表达大蛋白Cas9,可以根据细胞特性选择化学转染、腺病毒、腺相关病毒等多种方法导入或敲除相关基因;   b、提高基因敲除效率。在稳定表达Cas9蛋白的细胞系上进行基因敲除比瞬时转染Cas9进行基因敲除的效率更高;   c、可对同一细胞进行多个基因敲除实验。对于需要在同一个细胞系中进行多个基因的编辑或需要长期用一个细胞模型进行多项基因研......
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介绍下慢病毒载体安全使用注意事项

  慢病毒(Lentivirus)是一种逆转录病毒,它通过将靶基因引入难以转染的细胞(例如原代细胞)中并将该靶基因随机掺入宿主基因组中而显着增加转染效率。下面介绍下慢病毒载体安全使用注意事项。   1)慢病毒相关实验请在生物安全柜(BL-2级别)内操作。   2)操作病毒时请穿实验服,佩戴口罩和手套,尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。   3)操作病毒时特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染,请立即用 70%乙醇加 1%的SDS溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头,离心管,培养板,培养液请于84消毒液浸泡后统一处理。   4)如需要离心,应使用密封性好的离心管,如有必要请用封口膜封口后离心。   5)病毒相关的废弃物需要特殊收集......
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CytoCt™ RT-qPCR System

CytoCt™ RT-qPCR体系应用于试管或96孔板培养的10-100,000细胞基因表达水平的检测,该体系无需任何RNA纯化,操作更简便、快捷,灵敏度更高,实验数据更可靠。传统的方法是对培养细胞进行提取和纯化RNA,然后用RT-qPCR体系进行基因表达定量和分析。CytoCt™ RT-qPCR体系在96孔板或其他形式培养的细胞中制备细胞裂解物,无需RNA提取步骤,细胞裂解物通过two-step或者one-step RT-qPCR,在约1.5h即可完成基因定量检测。 GeneCopoeia提供的CytoCt™ RT-qPCR体系包括:CytoCt™ cell lysis buffer(只含裂解液)、CytoCt™ cDNA synthesis kit(含裂解液、cDNA合成试剂)和CytoCt™ One-Step RT-qPCR kits(含裂......
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