Monthly Archives: 一月 2021

慢病毒的相关知识内容介绍

  逆转录病毒( retrovirus ):RNA病毒,复制时在逆转录酶的作用下将RNA转化为cDNA,在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶的作用下扩增。 主要包括RNA肿瘤病毒、慢病毒、泡沫病毒等3种亚科。   慢病毒(Lentivirus):属于逆转录病毒科,名称源自该种病毒长达数年的潜伏期。经典的慢病毒是由HIV病毒改造而来,而且HIV-1/HIV-2系统也得到了广泛的应用,除了HIV病毒系统以外,后续还有猿类免疫缺陷病毒载体系统、猫免疫缺陷病毒载体系统、绵羊梅迪-维斯纳病毒(MMV)载体系统和马传染性贫血(EIA)载体系统等。   慢病毒结构:   2个调节基因:   (1)tat基因:反式激活因子,对HIV基因起正调控作用。   (2)rev基因:病毒蛋白表达调节因子......
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浅谈慢病毒和腺病毒的表达系统

  借助于病毒颗粒作为基因载体,该病毒的感染特性可用于自发感染哺乳动物细胞,并将目标基因导入哺乳动物细胞以完成目标产物的过表达或干扰。该技术目前被广泛用作基因,小RNA,转录因子功能验证,重组蛋白表达和转基因哺乳动物制备领域的主要技术工具。技术系统包括两个主要部分:慢病毒包装和病毒感染筛选。病毒包装是通过特定位点将靶基因片段与人工修饰的病毒基因组连接以形成重组病毒基因组和通过基因工程制备重组病毒的过程。传统上使用的病毒包装系统包括慢病毒包装系统和腺病毒。包装的慢病毒和腺病毒都可以自主感染哺乳动物细胞并引入外源基因。   慢病毒包装系统采用的是人工改造过后的HIV病毒系统,包括1个表达质粒和多个......
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病毒包装的关键点及如何提高病毒感染效率

  慢病毒可以插入细胞基因组并稳定表达很长时间。包装周期短(通常两个月),感染效率相对于腺病毒要低很多。不能扩增,一次包装的慢病毒用完后如果再需要只能重新包装。在一个包装中获得的病毒滴度也相对较低(10到8次方pfu / ml),不适合直接用于动物实验。   腺病毒感染非常高效,许多细胞可以达到近99%。纯化的腺病毒可以直接体内注射。它可以在体外扩增,每次使用后,都可以通过包装细胞本身进行扩增,从而节省了成本。在一个包装中获得的滴度更高(纯化后为10至11 ppu / ml,未纯化产品为10至10 pfu / ml)。它不能整合到基因组中,也不能稳定表达。表达时间比慢病毒的表达时间短(两到三周)。腺病毒的包装周期比慢病毒的包装周期更长......
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