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简单介绍转染效率的多种影响因素

  转染技术是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。以下转染试剂厂家的小编就向大家介绍转染效率的多种影响因素,主要因素有下面几个:

  1. 细胞培养物

  健康的细胞培养是成功转染的基础。不同的细胞具有不同的培养基,血清和补充剂。细胞产量低(<50)可以保证相同的基因型。高转染效率需要特定的细胞密度,普通转染试剂有特殊说明。建议在转染前24小时分裂细胞。这将导致正常的细胞代谢,并增加外来DNA摄取的可能性。避免被细菌,支原体和真菌污染。

  2. 血清

  大多数培养基在使用前需要血清。经常使用小牛胎儿血清(FCS),并且有较便宜的马或牛血清。血清通常是添加剂,其中包含生长因子和其他辅助因子的成分不准确,它们对不同细胞生长的影响也大不相同。血清质量的变化直接影响转染效率。因此,在转染前进行测试(向右)以尝试大量适合细胞增殖的血清,在转染过程中使用相同量的血清,阴性对照(无转染试剂和外源DNA)建议创建并测试单元。成长正常吗?一些转染技术,例如脂质体转染,在存在血清的情况下效率非常低,需要在转染前去除血清。但是,某些敏感细胞(例如原代细胞)可能会损坏或死亡,导致转染效率非常低。

  3. 载体构建

  转染载体(病毒载体,质粒DNA,RNA,PCR产物,寡核苷酸等)的构建也会影响转染结果。尽管病毒载体在感染特定宿主细胞方面更有效,但不同的病毒载体具有独特的宿主,有些需要特定的细胞周期。例如,逆转录病毒需要在分裂过程中感染宿主细胞。此外,还需要考虑一些安全问题。 (遗传污染等)。除构建载体外,载体的形状和大小对转染效率也有不同的影响,包括上述超螺旋和线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。当基因产物对细胞有毒性时,转染也很困难,因此选择组成和可控且强度合适的启动子也很重要。同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。

  4. DNA质量

  DNA质量对转染效率有重要影响。常见的转染技术(例如脂质体)基于电荷吸引原理。不纯净的DNA,例如少量的盐离子,蛋白质和代谢物污染,会对转染复合物的有效形成和转染的进程产生重大影响。

  5.转染技术

  转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。一些传统的转染技术

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