易锦生物提供的所有人、小鼠和大鼠ORF 克隆及其慢病毒、AAV 颗粒与重组蛋白均使用基于毛细管电泳的 Sanger 法“金标准”全长测序,保证氨基酸序列与NCBI 数据库一致。 All human and mice ORF clones and related Lentivirus, AAV particles and recombinant proteins provided by iGeneBio are fully sequenced using Sanger sequencing by capillary electrophoresis and Amino Acid Sequences are guaranteed to be matched with NCBI database.
A:考虑可能是底物、BirA酶活性、Buffer B三个方面的原因。1.检查底物蛋白质浓度、蛋白序列、筛选最优反应条件,我们建议AviTag底物在最终反应混合物中的浓度尽可能接近40μM。2.检查BirA的存放位置和时间。另外,一部分生物缓冲液如氯化钠、甘油和硫酸铵等可能会降低BirA的酶活性,建议降低这些底物溶液中这些试剂的浓度。我们建议使用50 mM bicine(pH=8.3),或者10 mM Tris-HCl(pH=8)作为缓冲液。如果蛋白质底物需要“盐”来保持稳定或活性,我们建议用谷氨酸钾代替氯化钠。3.检查Buffer B的存放位置和时间,如果是Buffer B中的ATP因水解而失效,可通过加入额外的ATP重启反应。也可以将反应体系置于4℃过夜,因为ATP在4℃环境中水解更慢。