产品介绍 GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换；其原理与 Gateway® 克隆技术相同。EZShuttle™ 重组克隆体系 主要包含以下产品：
1. EZRecombinase™ Mixes ：催化 attL x attR 和 attB x attP 重组反应。
2. pEZ™ 表达载体 ： 主要用于构建即用型表达克隆。
3. EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆： GeneCopeia 提供约 35,000 种人和小鼠的 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭 克隆。
EZShuttle™ 重组克隆体系与 Gateway® 克隆技术完全兼容，如表1所示。
表1. GeneCopoeia’s EZShuttle™ 重组克隆体系（左列）与 Gateway® 克隆技术完全兼容。
产品优势
• 由重组酶、表达载体和已验证 ORF 序列的穿梭克隆组成的一个完整的重组克隆体系；
• EZRecombinase™ LR Mix 和 EZRecombinase™ BP Mix 的活性高；
• 提供带有不同筛选标记和标签的 pEZ™ 表达载体，这些载体可用于基因克隆、基因编辑、蛋白质纯化和基因功能 分析；
产品应用
• 构建即用型表达克隆： 使穿梭克隆或其它 DNA 片段插入到表达载体。
• 蛋白质纯化： 使目的基因在一个或多个系统中表达，然后用于蛋白质纯化、形成结晶、抗体的制备、DNA 结合化验等。
• 启动子交换： 克隆目的基因到带有不同启动子的载体。
• 启动子分析： 利用报告基因测试不同启动子的功能，例如：荧光素酶。
• 基因标签： 表达不带标签或带有不同融合标签的目的基因，例如： 6XHis、Flag®、GFP 等；可用于免疫共沉淀或亚细胞 定位等。
EZShuttle™ 重组克隆体系原理
GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换；其原理与 Gateway® 克隆技术相同（图1）。
图 1. E.coli 和 λ 噬菌体位点间的重组机制。
备注: Gateway® 是 Life Technologies 的注册商标。
EZRecombinase™ LR Mix EZRecombinase™ LR Mix 增强版
GeneCopoeia 提供的 EZRecombinase™ LR Mix 可以使 DNA 片段高效、快速的在相兼容的载体间转换。
产品优点
• 高活性酶，EZRecombinase™ LR Mix 活性比 Gateway® LR Clonase ™ 的活性高；
• 与现有的 Gateway® 克隆技术完全兼容；
EZShuttle™ LR重组技术
在 EZRecombinase™ LR Mix 作用下，EZShuttle™ LR 重组技术将 DNA 片段从含有 attL 位点的 EZShuttle™ 或Gateway® Entry clone转移到含有 attR 位点的 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® pDEST 载体。 EZRecombinase™ LR Mix 包含 Int（λ Integrase）、IHF（E.coli Integration Host Factor）和 Xis（Excisionase）。
将 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone 与 pEZ™ 表达载体混合，然后加入 EZRecombinase™ LR mix，室温（25℃）反应 1 小时后用于转化 E.coli 感受态细胞（图2）。
图2. 一步法从 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone 转移 DNA 片段到 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® pDEST 载体。
pEZ™ vectors pEZ™ 表达载体
GeneCopoeia 提供的 pEZ™ 表达载体可以高效、快速的与 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆、ORFeome 克隆或 Gateway® Entry clone 在 EZRecombinase™ LR Mix 作用下发生重组反应，其功能与 Gateway® 目的载体相同。pEZ™ 表达载体含有不同类型的启动子、筛选标记和标签；也包含 safe harbor 基因敲入克隆载体，用于 CRISPR- 或 TALEN 介导的人类 AAVS1 或小鼠 ROSA26 位点的基因敲入。
EZShuttle™ clones EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆
GeneCopeia 提供约 35,000 种人和小鼠的 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆，其包含的 ORF 都经过全长测序验证。当 ORF 的 N- 端带有融合标签或不带标签时，需保留终止密码子；当 ORF 的 C- 端带有融合标签时，需去除终止密码子。EZRecombinase™ LR Mix 使 ORF 转换到 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® 目的载体中。EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆也带有多克隆位点，也可用于经典的的酶切-连接克隆过程（图3）。
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产品优点
• 所有的 ORF 经过全长测序；
• 终止密码子可选；
• 带有 attL 重组位点和多克隆位点；
• 可与 pEZ™ 表达载体和 Gateway® 目的载体发生重组反应；
图3. EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆带有重组位点(attL1 和 attL2)和多克隆位点(MC1 和 MC2)，可用于重组和传统酶切-连接的克隆过程。
EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆
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pEZ™ 表达载体
Competent E. coli
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