体外转录(in vitro Transcription)是以DNA为模板,在无细胞系中在一系列转录因子的作用下经RNA聚合酶合成RNA的过程。 转录合成的RNA可用于RNA结构和功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi、显微注射以及体外翻译等多方面的下游应用。用于体外转录反应的模板 DNA 包括目的序列上游的 RNA 聚合酶启动子,模板选项包括质粒、PCR 产物、寡核苷酸及cDNA 等含有对应启动子的线性化 DNA 模板。
T7 RNA Polymerase
T7 RNA Polymerase 是DNA依赖的 5’→3’ RNA聚合酶,以含有 T7 启动子序列的双链 DNA (线性化质粒或 PCR 产物)为模板,合成与启动子下游的反向单链 DNA 互补的 RNA,对 T7 噬菌体启动子具有高度特异性。还可以在反应中使用修饰的核苷酸作为底物,例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的核苷酸,合成带有标记的 RNA。 本产品使用经过优化的Transcription buffer,可在短时间内合成大量RNA。
DNase I
DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I 水解单链或双链DNA后的产物,5’端为磷酸基团,3’端为羟基。DNase I 的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子Mg2+、Mn2+等激活。在Mg2+存在的情况下,该酶可随机识别并切割双链DNA任意一条链上的任意位点;而在Mn2+存在的情况下,可识别并切割DNA两条链上几乎相同的位点,产生平末端或有1 – 2个核苷酸突出的粘末端DNA片段。
T7 RNA Synthesis Kit
T7 RNA Synthesis Kit 设计用于在体外生产大量 RNA。将T7 RNA Polymerase Mix、4种单独提供的核苷酸、和合适的线性 DNA 模板组合在一起,就能方便地完成反应。该试剂盒还可以通过加入帽子类似物来合成有帽子的RNA;或根据实验要求替换试剂盒中的UTP,使用修饰的UTP来合成修饰的RNA。试剂盒还包含LiCl Solution,用于去除转录产物的游离核苷酸、酶及大部分模板以获得粗纯化的RNA。
T7 RNA Co-Transcription Synthesis Kit
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体外合成RNA流程
Template Generation | in vitro Transcription | RNA Purification | ||
PCR & Purification | Cloning & Plasmid Production | RNA Synthesis | Capped RNA Synthesis | |
Taq DNA Polymerase Kit
(#PC003) |
OmicsLink™ Expression-Ready ORF cDNA Clones | T7 RNA Polymersae (#PC028/PC029) | DNase I
(#PC024) |
|
2× UltraHiPF® PCR Mix
(#PC033/PC034) |
Fast-Fusion™ Cloning Kit
(#FF001/FF002) |
T7 RNA Synthesis Kit
(#PC035/PC036) |
T7 RNA Co-Transcription Synthesis Kit
(#PC045/PC046) |
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UltraHiPF® DNA Polymerase Kit
(#PC018/PC019) |
Fast-Fusion™ Multi Seamless Cloning Kit
(#FF006/FF007) |
ATP / CTP / GTP / UTP / N1-Me-pUTP Solution
(#PC037/PC038/PC039/PC040/PC041) |
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DH5α Competent Cells (#CC001)
Stbl3 Competent Cells (#CC003) 2T1 Competent Cells (#CC007) |
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