产品介绍
Fast-Fusion™ Multi 无缝克隆试剂盒为 PCR 产物克隆提供了一种快速有效的方法，只需在条件（50℃） 下反应 5-60 分钟，任何 PCR 产物片段都能克隆到线性化载体上。经过简单纯化的 PCR 产物片段或者其他纯化的 DNA 片段能够与载体 DNA 末端的重叠序列融合连接（见图 1）。单个Fast-Fusion™ Multi 无缝克隆反应能够一次融合1~5个插入 DNA 片段。单个插入DNA片段能在5分钟内高效完成融合连接组装。预处理好的载体克隆阳性率几乎达到 100%。
利用本产品进行克隆连接无需限制性酶切位点，这项优势使得载体上的任何位点都可用于插入外源片段。线性化载体可通过 PCR 或者限制性酶切准备，PCR 产物片段可通过 Taq DNA 聚合酶或其他高保真 DNA 聚合酶扩增获得。
技术原理
Fast-Fusion™ Multi 无缝克隆可在等温条件下，单管反应实现多个带重叠末端的 DNA 片段的组装。Fast-Fusion™ Multi Seamless Mix预混液在同一反应缓冲液中有三种不同的酶活性：
- 核酸外切酶活性会产生单链 3´ 突出末端，促使互补的末端重复序列（重叠区）退火。
- 聚合酶活性会填补退火片段的缺口。
- DNA 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接。
最终形成双链闭合的 DNA 分子，可作为 PCR、RCA 的模板或其它分子生物学应用，包括直接转化。
产品优势
- 快速简便——1 分钟操作时间，快至5分钟反应；
- 适用性强——无需特定的限制性酶切位点或重组位点，PCR 或酶切产物都可克隆；
- 无缝克隆——不附加任何多余碱基序列；
- 灵活多变——一步完成1-8个插入片段融合，适用于多种 DNA 改造，多点突变易如反掌；
- 高效率高通量——转化简单，阳性率高达 90%以上。
实验步骤
图 1. 利用Fast-Fusion™ Multi Seamless cloning kit 将PCR片段插入线性化载体的流程图
