ExoCt™ RT-qPCR System是一种无需提取外泌体RNA即可直接对外泌体进行不同基因表达水平的定量检测体系。ExoCt™ First-Strand cDNA Synthesis Kit由ExoCt™ RT-for-All™ Buffer和ExoCt™ PAP/RTase Mix组成，可在同一反应管内对外泌体中的多种RNA模板(包括miRNA, mRNA, LncRNA等)同时进行逆转录反应。ExoCt™ SYBR® Green RT-qPCR Kit 包含逆转录试剂和qPCR试剂，利用基于SYBR® Green的qPCR技术，快速准确地定量检测外泌体RNA。整个产品系列试剂盒包括ExoCt™ First-Strand cDNA Synthesis Kit和ExoCt™ SYBR® Green RT-qPCR Kit。
产品优势
- 操作简便：无需RNA提取，外泌体裂解物可直接进行基因定量检测
- 兼容性高：在同一个反应中对外泌体所有miRNA、mRNA和LncRNA同时进行逆转录
- 适用广：可根据不同种类RNA灵活的进行后续qPCR反应的分析和定量
操作流程
在已纯化的外泌体中加入等量的ExoCt™裂解缓冲液，然后在PCR仪设置37℃ 10分钟，75℃ 10分钟。外泌体裂解物可直接用于ExoCt™逆转录反应，cDNA产物可用于miRNA、mRNA和LncRNA等基因的qPCR检测。
图一：外泌体裂解物和提取RNA的RT-qPCR比较结果。在175mm的培养皿中接种密度为3 × 107的细胞，培养至细胞丰度为70% ~ 90%。收集40ml细胞培养基，使用ExoSure™ Exosome Isolation Kit纯化外泌体。HEK293(红色)，MSC(灰色)，H2228(黄色)，H3122(蓝色)的外泌体分别使用GeneCopoeia的ExoCt™ Lysis Buffer裂解以及提取RNA。使用ExoCt™逆转录试剂将外泌体裂解物或提取的RNA逆转录为cDNA。然后使用cDNA进行基因表达检测。
图二：同一反应管中使用RT-for-all™逆转录试剂同时将miRNA, mRNA和LncRNA进行逆转录。在175mm的培养皿中接种密度为3 × 107的细胞，培养至细胞丰度为70% ~ 90%。收集40ml细胞培养基，使用ExoSure™ Exosome Isolation Kit纯化外泌体。使用GeneCopoeia的ExoCt™Lysis Buffer裂解外泌体。然后使用ExoCt™RT-For-All™试剂将外泌体裂解物逆转录为cDNA。利用cDNA进行基因表达检测。A . HEK293细胞的外泌体裂解物。B .H3122细胞的外泌体裂解物。
图三：外泌体裂解物进行RT-qPCR检测。在175mm的培养皿中接种密度为3 × 107的细胞，培养至细胞丰度为70% ~ 90%。收集40ml细胞培养基，使用ExoSure™ Exosome Isolation Kit纯化外泌体。使用GeneCopoeia的ExoCt™Lysis Buffer裂解外泌体。然后使用ExoCt™RT-For-All™试剂或者Takara逆转录试剂将外泌体裂解物逆转录为cDNA。利用cDNA进行基因表达检测。 A.MSC细胞的外泌体裂解物。B .H3122细胞的外泌体裂解物。
