复能易锦提供的全部人类和小鼠ORF克隆及相关慢病毒和AAV病毒,所提供的载体质粒均采用毛细管电泳sanger全长测序验证,并承诺编码的氨基酸序列与NCBI数据库匹配。 All human and mice ORF clones and related Lentivirus, AAV particles and recombinant proteins provided by iGeneBio are fully sequenced using Sanger sequencing by capillary electrophoresis and Amino Acid Sequences are guaranteed to be matched with NCBI database.
UltraHiPF® DNA Polymerase是一种耐热的超保真DNA聚合酶,具有5′-3’聚合酶活性和3′-5’外切酶活性,能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板,能够扩增富含GC或AT的模板,能扩增低至1个拷贝的基因组,不同种属来源DNA模板均能扩增超过12 kb的片段。使用UltraHiPF® DNA Polymerase 进行扩增,复杂的模板的扩增速度也能够达到15~30 sec/kb;多种模板在变性、退火和延伸皆为1sec的条件下,均能特异扩增2 kb产物。使用Sanger测序的方法进行检测,该酶突变率比Taq DNA聚合酶低55倍。使用该产品扩增得到的PCR产物为平滑末端。
图1.使用UltraHiPF DNA Polymerase以Lambda DNA为模板,添加0.2mM的dUTP,扩增2kb的目标片段,最后用尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG) 37℃处理1小时。扩增结果为添加dUTP不影响扩增的效果;只有添加dUTP的产物,能够被尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)消化,显示出UltraHiPF DNA Polymerase能够读取和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板的性能。
扩增速率
图2.使用UltraHiPF DNA Polymerase以Lambda DNA,Adenovirus DNA和K562基因组为模板扩增长度分别为2.0 kb的目标片段,在TaKaRa触屏版96孔梯度PCR仪(TKR-TP350)设置程序的变性、退火和延伸时间皆为1秒。所有模板均可以扩增目标片段,显示出UltraHiPF DNA Polymerase扩增速度快的性能。
高保真度
图3.使用UltraHiPF DNA Polymerase,两种竞品DNA Polymerase与Taq DNA Polymerase分别扩增同一个LacIOZa模板,目标片段约2.5Kb,克隆产物进行Sanger测序,结果显示UltraHiPF DNA Polymerase突变率比Taq DNA Polymerase低55倍,同时也比两种竞品DNA Polymerase低2倍。
扩增不同GC含量
图4.使用UltraHiPF DNA Polymerase与两种竞品DNA Polymerase,以K562基因组为模板扩增不同GC含量的片段,结果显示从GC含量25%-84%,我们的UltraHiPF DNA聚合酶都可以实现高产量高特异性扩增,而V公司SF和N公司HF在同样的条件特异性扩增效果较弱,甚至无法扩增。
扩增重复序列
图5.使用UltraHiPF DNA Polymerase与两种竞品DNA Polymerase分别扩增MPRM34109(NM_016960基因启动子克隆)和EBNA-1(YP_401677.1)的质粒模板,实验结果如图,其中箭头指示为扩增的目标片段。UltraHiPF DNA Polymerase均可进行特异性扩增,而V公司SF和N公司HF在同样条件下的扩增特异性较弱。
扩增不同长度的比较
图6.使用UltraHiPF DNA Polymerase与两种竞品DNA Polymerase,以Lambda DNA,Adenovirus DNA,K562基因组为模板扩增长度分别为2kb, 5kb, 8kb, 12kb的目标片段。UltraHiPF DNA聚合酶都可以实现高产量特异性扩增,而竞品V公司SF和N公司HF在同样的条件下,产量或特异性较弱,甚至无法扩增K562基因组的EGFR部分片段。
与竞品酶扩增不同DNA浓度的比较
图7.使用UltraHiPF DNA Polymerase与两种竞品DNA Polymerase分别扩增不同DNA浓度(每个梯度皆包含50ng鲑鱼精)的模板。A.模板为Lambda DNA。B.模板为K562基因组DNA。UltraHiPF DNA Polymerase均能扩增低至1 copies的模板DNA,扩增灵敏度及扩增产量均优于V公司和N公司竞品。