产品介绍 GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换；其原理与 Gateway® 克隆技术相同。EZShuttle™ 重组克隆体系 主要包含以下产品：
1. EZRecombinase™ Mixes ：催化 attL x attR 和 attB x attP 重组反应。
2. pEZ™ 表达载体 ： 主要用于构建即用型表达克隆。
3. EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆： GeneCopeia 提供约 35,000 种人和小鼠的 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆。
EZShuttle™ 重组克隆体系与 Gateway® 克隆技术完全兼容，如表1所示。
表1. GeneCopoeia’s EZShuttle™ 重组克隆体系（左列）与 Gateway® 克隆技术完全兼容。
产品优势
由重组酶、表达载体和已验证 ORF 序列的穿梭克隆组成的一个完整的重组克隆体系；
EZRecombinase™ LR Mix 和 EZRecombinase™ BP Mix 的活性高；
提供带有不同筛选标记和标签的 pEZ™ 表达载体，这些载体可用于基因克隆、基因编辑、蛋白质纯化和基因功能分析；
产品应用
构建即用型表达克隆： 使穿梭克隆或其它 DNA 片段插入到表达载体。蛋白质纯化： 使目的基因在一个或多个系统中表达，然后用于蛋白质纯化、形成结晶、抗体的制备、DNA 结合化验等。启动子交换： 克隆目的基因到带有不同启动子的载体。启动子分析： 利用报告基因测试不同启动子的功能，例如：荧光素酶。基因标签： 表达不带标签或带有不同融合标签的目的基因，例如： 6XHis、Flag®、GFP 等；可用于免疫共沉淀或亚细胞 定位等。
EZShuttle™ 重组克隆体系原理
GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换；其原理与 Gateway® 克隆技术相同（图1）。
图 1. E.coli 和 λ 噬菌体位点间的重组机制。
备注: Gateway® 是 Life Technologies 的注册商标。
BP & LR Mix EZRecombinase™ BP Mix (Cat.No. ER003/ER004) 增强版 GeneCopoeia 提供的 EZRecombinase™ BP Mix 可以使 DNA 片段高效、快速的在相兼容的载体间转换。EZRecombinase™ BP mix 催化含有 attB 位点的 DNA 片段与含有 attP 位点的载体进行重组反应，生成新的 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone。
EZRecombinase™ BP II Enzyme Mix (Cat.No. ER013/ER014)预混版 BP II Enzyme Mix对比BP Mix，BP酶和反应buffer经优化形成预混溶液，更加稳定，可以保存在-20℃。
产品优点
高活性酶；
与现有的 Gateway® 克隆技术完全兼容；
2种形式可选：预混形式和非预混形式；
EZRecombinase™ LR Mix (Cat.No. ER001/ER002) 增强版 GeneCopoeia 提供的 EZRecombinase™ LR Mix 可以使 DNA 片段高效、快速的在相兼容的载体间转换。
产品优点
高活性酶，EZRecombinase™ LR Mix 活性比 Gateway® LR Clonase ™ 的活性高；
与现有的 Gateway® 克隆技术完全兼容；
EZShuttle™ BP重组技术
EZRecombinase™ BP mix 包含 Int 和 IHF，催化含有 attB 位点的 DNA 片段与含有 attP 位点的载体进行体外重组反应，生成新的 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone。
将 attB-PCR产物或 Expression clone 与 pShuttle™ 载体混合，然后加入 EZRecombinase™ BP mix，室温（25℃）反应 1 小时后用于转化 E.coli 感受态细胞（图2）。
图2. 一步法将含有 attB 位点的 DNA 片段转移到 pShuttle™ 载体或 Gateway® pDONR ™ 载体。
EZShuttle™ LR重组技术 在 EZRecombinase™ LR Mix 作用下，EZShuttle™ LR 重组技术将 DNA 片段从含有 attL 位点的 EZShuttle™ 或Gateway® Entry clone转移到含有 attR 位点的 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® pDEST 载体。 EZRecombinase™ LR Mix 包含 Int（λ Integrase）、IHF（E.coli Integration Host Factor）和 Xis（Excisionase）。
将 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone 与 pEZ™ 表达载体混合，然后加入 EZRecombinase™ LR mix，室温（25℃）反应 1 小时后用于转化 E.coli 感受态细胞（图3）。
图3. 一步法从EZShuttle™或 Gateway® Entry clone 转移DNA 片段到pEZ™表达载体或Gatewayt® pDEST载体。
pShuttle™ vectors pShuttle™ 载体 GeneCopoeia 提供的pShuttle™载体用于生成新的带有attL位点的EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆或 Gateway® Entry clone。pShuttle-D01通过BP重组技术生成穿梭克隆；pShuttle-D02通过酶切-连接方法生成穿梭克隆；pShuttle-D03通过同源重组方法生成穿梭克隆，与本公司的Fast-Fusion™克隆试剂盒相匹配。
E. coli 感受态
表达载体 pEZ™ 表达载体 GeneCopoeia 提供的 pEZ™ 表达载体可以高效、快速的与 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆、ORFeome 克隆或 Gateway® Entry clone 在 EZRecombinase™ LR Mix 作用下发生重组反应，其功能与 Gateway® 目的载体相同。pEZ™ 表达载体含有不同类型的启动子、筛选标记和标签；也包含 safe harbor 基因敲入克隆载体，用于 CRISPR- 或 TALEN 介导的人类 AAVS1 或小鼠 ROSA26 位点的基因敲入。
E. coli 感受态
EZShuttle™ clones EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆
GeneCopeia 提供约 35,000 种人和小鼠的 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆，其包含的 ORF 都经过全长测序验证。当 ORF 的 N- 端带有融合标签或不带标签时，需保留终止密码子；当 ORF 的 C- 端带有融合标签时，需去除终止密码子。EZRecombinase™ LR Mix 使 ORF 转换到 pEZ™ 表达载体或 Gatewayt® 目的载体中。EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆也带有多克隆位点，也可用于经典的的酶切-连接克隆过程（图4）。
点击搜索 EZShuttle™ Gateway® PLUS ORF clone collections.
产品优点
所有的 ORF 经过全长测序；
终止密码子可选；
带有 attL 重组位点和多克隆位点；
可与 pEZ™ 表达载体和 Gateway® 目的载体发生重组反应；
图4. EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆带有重组位点(attL1 和 attL2)和多克隆位点(MC1 和 MC2)，可用于重组和传统酶切-连接的克隆过程。
E. coli 感受态
