• 复能易锦提供的全部人类和小鼠ORF克隆及相关慢病毒和AAV病毒，所提供的载体质粒均采用毛细管电泳sanger全长测序验证，并承诺编码的氨基酸序列与NCBI数据库匹配。
    All human and mice ORF clones and related Lentivirus, AAV particles and recombinant proteins provided by iGeneBio are fully sequenced using Sanger sequencing by capillary electrophoresis and Amino Acid Sequences are guaranteed to be matched with NCBI database.
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GeneHero™ CRISPR-Cas9 产品与服务

-RNA导向的精确、灵活的基因组编辑工具

介绍

GeneCopoeia GeneHero™CRISPR-Cas9产品和服务为您的基因组编辑需求提供了完整、强大的解决方案。 产品和服务包括：

  • 用于人、小鼠和大鼠的全基因组 sgRNA 克隆。 在我们的数据库中可搜索超过45,000个经过序列验证的、可用CRISPR 技术介导敲除的人、小鼠和大鼠基因。
  • HDR 供体克隆载体和定制的 HDR 供体克隆构建。可用于通过同源重组介导的 CRISPR 基因组编辑应用。
  • Cas9稳定细胞系。预制 Cas9 稳定表达细胞系特别适用于sgRNA文库筛选和其他高通量 CRISPR-Cas9 应用。
  • Safe Harbor 基因敲入试剂盒及 ORF 敲入克隆。使用我们的人类 AAVS1 和小鼠 ROSA26Safe Harbor 基因敲入试剂盒可以轻松实现几乎任何DNA片段的成功敲入。人类及小鼠各有超过20,000条经过序列验证的ORF可用于转入基因的供体克隆设计。
  • IndelCheck™ 插入缺失检测体系。IndelCheck™ CRISPR/TALEN 插入缺失检测体系是一套设计用于验证基因组编辑工具功能或检测编辑阳性细胞的完整体系，包括靶点 PCR 试剂盒、T7 核酸内切酶 I 检测试剂盒以及靶点 PCR 克隆试剂盒。另外，靶位点特异性PCR引物亦可选择。
  • sgRNA 文库。我们提供7款预制的、通路特异性的 sgRNA 文库，每款都有慢病毒颗粒、转染级质粒 DNA 以及菌种等三种形式可供选择。客户也可以自行定制满足实验需求的 sgRNA 文库。
  • VividFISH™染色体FISH计数探针。FISH是帮助您鉴定靶基因拷贝数的强大工具。在进行基因组编辑实验前使用VividFISH™探针来鉴定目的染色体拷贝数，可对后续筛选目的修饰阳性克隆有所帮助。

优势

  • RNA导向的基因组DNA识别，无需考虑DNA甲基化
  • 较ZFN和TALEN，有相同或更高的基因编辑效率
  • 可同时编辑多个基因（多重靶向编辑）
  • 设计简单快速，无需重复构建核酸内切酶

CRISPR工作原理

CRISPR-Cas系统（The clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats-associated protein systems）是一个细菌及古细菌进化出来用以抵御病毒和质粒入侵的适应性机制。CRISPR-Cas系统的高效基因组编辑功能已被应用于多种生物，包括斑马鱼、小鼠、大鼠、秀丽隐杆线虫、植物及细菌。多个科研小组的研究都显示，与锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活样效应核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases, TALEN）相比较，CRISPR-Cas系统介导的基因组靶向实验在细胞或斑马鱼中具有相似甚至更高的效率。

CRISPR-Cas9体系的RNA-DNA识别机制为基因组工程研究提供了一项简便而强大的工具。该体系其中一个最重要的优势是Cas9蛋白可在多个不同的gRNA的引导下同时靶向多个基因组位点。

图 1. CRISPR/Cas9介导的基因组编辑原理图

在II型CRISPR系统中，CRISPR RNA（crRNA）与转录激活crRNA（Trans-activating crRNA, tracrRNA）退火形成的复合物能特异识别基因组序列，引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂（double-strand breaks, DSBs）。 这个识别复合体可以通过融合crRNA与tracrRNA序列形成sgRNA（single-guided RNA）进行简化。基因组的靶序列中有长约20bp的片段与crRNA或sgRNA互补配对；靶序列末端的三核苷酸区域PAM（5’-NGG-3’）为Cas9识别位点，是实现剪切功能的关键。

 

图2. CRISPR-Cas9介导的基因编辑。（左）：sgRNA引导Cas9核酸酶作用于基因组，形成的DSBs被非同源末端连接（NHEJ）机制修复；（右）：sgRNA引导Cas9核酸酶作用于基因组，形成DSBs，同源重组（HR）作用下，供体质粒上的目标基因及筛选标记（或其他遗传元件）在断裂处被整合进基因组。

 

图3: 切口酶在结合链生产单链切口的原理图

TALEN 与 CRISPR-Cas9 体系对比

特性

TALEN

CRISPR-Cas9
识别方式

蛋白质 – DNA

RNA-DNA

甲基化敏感性

敏感

不敏感

染色质结构敏感性

敏感

敏感

脱靶效应

较少观察到脱靶效应

潜在脱靶效应高于 TALEN 及ZFN

多靶点操作

极少用

可用

基因组编辑应用

转录激活样效应因子（TAL Effectors）和CRISPR-Cas9可高效且精确地改造细胞系及模式动物的基因组。具体的基因组编辑应用可见下表。

基因组修饰 描述 基因组编辑工具 供体DNA
内源基因标记 利用上融合标签（如荧光素酶、GFP等）跟踪内源性启动子活性或内源性蛋白的表达与定位。 TALEN 或CRISPR 必需
内源基因突变 在内源基因序列中引入点突变 TALEN 或CRISPR 必需
内源基因敲除 引入缺失或插入（如：筛选标记）敲除内源基因 TALEN 或CRISPR 若需建立敲除细胞系，则强烈建议使用。
内源基因表达激活 靶向激活内源基因表达 TALE-TF或 CRISPR-TF 不适用
内源基因表达抑制 靶向抑制内源基因表达 TALE-R 或CRISPR-R 不适用
Safe harbor 位点敲入 敲入外源ORF或其他遗传因子到人或小鼠基因组的safe harbor位点 TALEN或CRISPR 必需

 

For further references, click here.

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