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miRNA 3′ UTR 克隆

产品介绍
GeneCopoeia提供哺乳动物表达载体的人、小鼠、大鼠miRNA 3′ UTR克隆,可用于miRNA靶标验证、预测靶标的功能确证和miRNA对靶标的调控作用的研究。

本公司提供两套3’UTR报告载体。在pEZX-MT05载体中,我们将3’UTR序列(来源于公开的基因序列数据库)插入到Gaussia荧光素酶报告基因下游,在哺乳动物细胞中由SV40启动子驱动转录生成Gaussia荧光素酶(Gluc)和3’UTR靶标序列的嵌合mRNA,因此无需裂解细胞实时监测Gluc的表达,研究mRNA-miRNA的相互作用。在相同载体(pEZX-MT05)上带有分泌型碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。CMV启动子驱动转录的SEAP作为同质粒内的对照,这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。

pEZX-MT06是Firefly/Renilla双荧光素酶报告载体。3’UTR序列在Firefly(hLuc)荧光素酶报告基因下游,CMV启动子驱动转录的Renilla(hRLuc)作为同质粒内的对照。通过裂解细胞检测hLuc和hRLuc的表达。

mirna target with luciferase reporter

            图1. miRNA 3′ UTR克隆载体骨架

图2. 靶标序列(3′ UTR)表达克隆中miRNA的抑制作用

已知LIN28基因是miR-125a的靶标。HEK 293细胞转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆(左)或者共转染miR-125a前体miRNA表达克隆(右)。转染24小时后检测GLuc 和内参SEAP活性。仅转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆的细胞中Gluc和SEAP活性之比定为1(左),以此确定共转样本中的比值。如图所示,miR-125a抑制了GLuc-LIN28-3′-UTR克隆中Gluc 70%以上的活性。

优势

可进行活细胞分析

  • 分泌型GLuc报告基因
  • 无需裂解细胞
  • 节省时间和样本,减少突变,简化试验流程

双报告载体系统

  • 可以对多样本常规转染进行精确比较

高通量兼容

  • 多个样本可同时分析

高灵敏度

  • GLuc比萤火虫或Renilla荧光素酶灵敏度高1000倍

使用方便

  • 所有靶标(3′ UTR)克隆均可用于即时转染

技术电话

020-32068595
4006020200

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