回答:Invitrogen公司有一系列的pDEST表达载体(目标载体)和ORFEXPRESS™ 穿梭克隆相匹配,这些载体可以在细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等不同的宿主中表达各种类型 ...
常见问题(FAQs)
GeneCopoeia提供其他物种的ORF克隆吗?
回答:我们目前提供已构建的人、小鼠ORF克隆。我们正要推出其他模式动物(如大鼠)的全长ORF克隆。如果您拥有感兴趣的模式动物基因的全长ORF序列,请提供给我们这些基因的基本信息(GenBank...
我做了表达实验,但却没有目标蛋白的表达,为什么?
回答:一个带有启动子的正确的ORF...
Genome editing products
基因组编辑产品 常见问题 我能用基因组编辑技术在基因组上引入一个点突变吗? 能:能。对于这种基因组编辑操作,您需要带有靶点同源重组臂以及所需点突变的供体 DNA。供体 DNA 可以是一个质粒或一条单链的寡聚核苷酸。供体...
哪些表达载体适用于将感兴趣的ORFs通过ORFEXPRESS™ Gateway® 穿梭克隆转移到表达载体上?
回答:Invitrogen公司有一系列的pDEST表达载体(目标载体)和ORFEXPRESS™ 穿梭克隆相匹配,这些载体可以在细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等不同的宿主中表达各种类型 ...
GeneCopoeia提供其他物种的ORF克隆吗?
回答:我们目前提供已构建的人、小鼠ORF克隆。我们正要推出其他模式动物(如大鼠)的全长ORF克隆。如果您拥有感兴趣的模式动物基因的全长ORF序列,请提供给我们这些基因的基本信息(GenBank...
我做了表达实验,但却没有目标蛋白的表达,为什么?
回答:一个带有启动子的正确的ORF...
你们对每一个基因都做过表达了吗?
回答:我们对所有全长ORFs进行了 用pReceiever-B01载体和一种表达宿主细胞(E. coli)在一种表达条件的表达实验。我们没有用其它表达宿主细胞和其它表达条件对所有全长ORFs进行蛋白表达的检测。...
通过全序列测序,我发现这是我感兴趣的基因中的一个可变剪接体,你们能重新克隆或替换它吗?
回答:我们将尽最大的努力克隆原始的剪接形式,为你提供有偿替换的克隆。但是,我们无法保证得到特异的剪接体的克隆,也无法确定获得的克隆的具体日期。...
在序列上有一个核苷酸碱基的改变,而且它所编码的氨基酸正是位于许多文献上报道的蛋白的活性位点,你们将会如何处理?
回答:对于这类情况,尽管我们不提供无偿克隆替换,但是我们可以以最低价提供突变服务(可以改变任意地核苷酸组成)。...
因为是用PCR的方法扩增全长ORFs,你们将如何处理从你们那里购买的由于PCR产生的突变的ORF克隆?
回答:我们的系统结合了一些新的、高保真的PCR专利技术,这些方法可以使扩增全长ORFs的保真度提高10倍。它是通过在低的反应温度下减少引物与模板DNA...
如何解释你们实际序列与GenBank上序列的差异?
回答:有两种不同的可能或两者兼而有之的可能:1)自然因素,包括遗传多态性、选择性剪接方式、NCBI数据库注释的更新导致基因的多个版本、数据递交者的DNA测序的错误或着模糊不清;2)PCR过程导致的改变。购买ORF克隆的用户往往只是将我们的O...
你们是如何生产全长的ORF的?
回答:我们结合多种专利技术以提高PCR的保真度,通过PCR把全长的ORF扩增出来(详见ORF白皮书)。我们采用70多种人组织cDNA 文库作为模板来生产全长ORF。...
我想对ORFs进行测序,我需要用什么引物?
回答:对于ORFEXPRESS™ 穿梭克隆,正向测序引物(ORF 5'端上游)是:5'-CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG,反向引物(ORF...
你们是如何对你们的克隆进行质量控制的?
回答:我们对每一个全长ORF克隆进行了测序。另外,在每个克隆投递給你之前,我们会再次用ORF特异性的核酸引物进行PCR验证,确保投递的克隆正确无误。...
我在你们公司的网页的数据库中找不到我所需要的基因,你们能为我克隆该基因吗?价格如何?
回答:是的,我们可以为你克隆你所需要的基因。我们的目标是克隆人类所有基因的全长ORF,我们正朝这方面努力。你所感兴趣的基因有可能已在我们的生产线上或即将进行克隆。如果你给我们提供GenBank...
在某些情况下,当比较你们的参照序列与NCBI上具有相同基因名称或描述的序列时,发现这两者间有一定程度上的差异。您如何解释这种矛盾?
回答:由于编码基因的多选择性剪接,以及从不同实验室关于ORFs、多态性或由于克隆复制出现冗余等的最新信息,一个基因座上的基因通常有多个转录产物。因此在选择基因全长的ORF克隆时,我们尽量选择每个基因座上最有代表性的转录本,这个转录本与同一基...
你们的网页上相关基因/克隆所注释的序列与你提供的克隆的实际序列是否一致?
回答:不,你所看到的序列并非我们的克隆的实际序列。该序列是从NCBI (GenBank)上序列记录中选择出来的 并用以设计5′和3′端引物以及合成全长ORF的参考序列。...
多克隆位点(MCS)的序列是什么?
回答:多克隆位点(MCS)序列是根据你所购买的ORFEXPRESS™ 穿梭克隆和 OmicsLink™表达克隆上全长ORF的不同而决定的。首先你要核对随产品邮寄的数据表里的信息,并通过如下图示的简图确认序列。...
OmicsLink™ 表达克隆的筛选标记是什么?
回答:Ampicillin或Neomycin. 请仔细确认后再订购OmicsLink™ 表达克隆...
ORFEXPRESS™ 穿梭克隆的筛选标记是什么?
回答:Kanamycin.
你们的OmicsLink™ 表达克隆与Gateway® pDEST目的载体(表达载体)构建的表达克隆有何区别?
回答:广州复能基因有限公司的 OmicsLink™ Expression...
如果我用Gateway®克隆系统表达N端融合蛋白,ORFEXPRESS™穿梭克隆上的重组位点(attB)和多克隆位点将会成为编码序列,那么有多少个氨基酸被添加到标签蛋白和所需蛋白的N末端之间?
回答:融合多肽与ORF之间有14个氨基酸残基,其中AttB重组位点编码8个氨基酸(Thr Ser Leu Tyr Lys Lys Ala...
我想把ORFEXPRESS™ 穿梭克隆上的ORF转移到自己的含有某些特征的载体里去,但这些载体不与Gateway®兼容的,怎么办?
回答:每一个ORFEXPRESS™ 穿梭克隆中的ORF两侧都有两个多克隆位点(MCS)。你可通过选择合适的内切酶, 在ORFEXPRESS™ 穿梭克隆上切出完整的ORFs,...
当表达C-端融合蛋白时如何把全长ORF上的终止密码子除去?
回答:可以通过点突变的方法去除终止密码子。我们大约已经构建了20,000多个在3′端带有不同标签蛋白序列的全长ORF OmicsLink™ 表达克隆(Expression...
可以用ORFEXPRESS™ 穿梭克隆表达一个含有N端或C端标签蛋白的融合蛋白质吗?
回答:可以,有两个选择。你可选用我们开发和构建的OmicsLink™ 表达克隆。此表达克隆已经将ORF构建在N端或C端带有不同标签蛋白的表达载体,请到网页...
你们是如何选择克隆在ORFEXPRESS™ 穿梭克隆的全长ORFs的?
回答:选择过程是十分严格的。包括从多种cDNA数据库和基因组数据库中全长编码基因序列的提取、比较和确认以及相关信息的注释。通过计算机聚类和人工校正的方法来减低冗余并排除错误的基因。...
怎样选择合适的表达载体把感兴趣的ORF 从ORFEXPRESS™ 穿梭克隆转移到表达载体?
回答:Invitrogen公司有一系列的pDEST表达载体(目标载体)和ORFEXPRESS™...
为什么说ORFEXPRESS™ 穿梭克隆是与Gateway®克隆技术是相兼容的?
回答:ORFEXPRESS™ 穿梭克隆载体是由美国GeneCopoeia公司构建。其特点是通过重组技术把在重组位点attL1和attL2间的全长ORF整合到Gateway®...
为什么应该选择全长ORF克隆而非其他的全长cDNA克隆?
回答:全长ORF克隆只含有全长蛋白质的编码序列而其他全长cDNA克隆则还包含一些非翻译的序列,如5'端或3'端非翻译区。众所周知,在表达宿主中,...
什么是全长ORF克隆?
回答:一个全长ORF(开放阅读框)克隆是指一个插入有编码全长蛋白质的DNA片断的质粒。该插入DNA片断只含有编码一个全长蛋白质的序列(从起始密码到终止密码),而不包含有5′或3′端的非翻译区(UTRs)或内含子。...