CytoCt™ RT-qPCR体系应用于试管或96孔板培养的10-100,000细胞基因表达水平的检测，该体系无需任何RNA纯化，操作更简便、快捷，灵敏度更高，实验数据更可靠。传统的方法是对培养细胞进行提取和纯化RNA，然后用RT-qPCR体系进行基因表达定量和分析。CytoCt™ RT-qPCR体系在96孔板或其他形式培养的细胞中制备细胞裂解物，无需RNA提取步骤，细胞裂解物通过two-step或者one-step RT-qPCR，在约1.5h即可完成基因定量检测。
GeneCopoeia提供的CytoCt™ RT-qPCR体系包括：CytoCt™ cell lysis buffer（只含裂解液）、CytoCt™ cDNA synthesis kit（含裂解液、cDNA合成试剂）和CytoCt™ One-Step RT-qPCR kits（含裂解液、一步法RT-qPCR试剂）。
产品优势
- 操作简便：在96孔板或试管中快速地将细胞裂解，无需RNA提取，裂解物可直接进行基因定量检测
- 灵敏度高：可对10-100,000细胞裂解物进行有效的基因检测
- 兼容性：CytoCt™ RT-qPCR系统兼容SYBR Green和Probe检测体系
- 重复性：实验步骤少，孔间的操作误差减少，实验结果具有更高的重复性
操作流程
将细胞培养到所需的细胞数，然后加入裂解液，在室温下孵育10分钟。转移到PCR板上，运行程序：25℃ 2分钟，37℃ 5分钟，75℃ 10分钟。裂解物可以直接进行RT-qPCR反应，或者储存起来以备将来使用。
图一：CytoCt™ RT-qPCR体系的灵敏度（试管、96孔板）。A.在试管中的应用，使用GeneCopoeia、Ambion或BioRad的裂解缓冲液裂解HCT116细胞，使用GAPDH基因进行RT-qPCR分析。取浓度范围为5 ~ 5000个细胞每微升的悬浮细胞与裂解缓冲液混合，按照各产品的操作说明书进行处理。每RT-qPCR反应使用2µl细胞裂解液(相当于1-1000个细胞每反应)。 B.在96孔板中的应用，H1299细胞接种于96孔板中，密度梯度为每孔250 ~ 5000个细胞。培养96小时后，每孔的最终细胞数估计约为2500~ 50000个细胞，向孔板中加入裂解缓冲液，按照操作说明书进行处理。每RT-qPCR反应使用2µl细胞裂解液(相当于10-200个细胞每反应)。
图二：使用常规RNA提取法及CytoCt™裂解法分别处理相同数量的细胞，通过One-Step RT-qPCR检测基因表达情况。每个反应的细胞量约为1500个。A. 检测HCT116细胞中的42个基因。B. 检测H1299细胞中的37个基因。
图三：使用Genecopoeia（纵坐标）和BioRad（横坐标）的lysis buffer分别处理相同数量的细胞，通过One-Step RT-qPCR检测基因表达情况。每个反应的细胞量约为1500个。A. 检测HCT116细胞的43个基因。B. 检测H1299细胞中的37个基因。
图四：在96孔板中使用细胞裂解液进行多基因检测。将3000 – 5000个HEK293细胞接种在96孔板中培养，至细胞达到70% – 90%的丰度。分别使用GeneCopoeia、BioRad的裂解液以及RNA提取试剂按使用说明处理等量细胞，使用一步法RT-qPCR试剂，检测8个基因的表达。
