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人类第19号染色体上的 AAVS1（又名为 PPP1R2C 位点）是一个经过验证、能确保转入 DNA 片段预期功能的“安全港”位点。该位点是一个开放的染色体结构，能保证转入基因能被正常转录。另外很重要的一点是在该位点插入外源基因片段对细胞无已知的副作用。
靶向 AAVS1 位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系能特异剪切人类第19号染色体上的 AAVS1 位点，生成DNA双链断裂（DSB），触发DNA的自然修复机制，诱导位点与 AAVS1 供体 DNA 克隆之间发生同源重组（HR），将供体克隆上的 DNA 片段整合到基因组上的 safe harbor 位点。
| 货号 | 产品 | 描述 | 目录价 |
| 多种 | 人类 AAVS1 ORF 敲入克隆 | 由 CMV 启动子启动 ORF 表达。能将 ORF 或您的目的基因敲入人类 AAVS1 safe harbor 位点。 |  |
Genome-TALER™ 人类 AAVS1 Safe Harbor 基因敲入试剂盒
试剂盒专为转基因实验设计，能通过 TALEN 介导的同源重组将您感兴趣的基因、筛选标记或其他遗传因子转入位于人类第19号染色体上的AAVS1 safe harbor位点。 试剂盒包含一对 AAVS1 TALEN 质粒，一个 AAVS1 供体载体或一个供体克隆质粒*，一个阳性对照供体克隆质粒以及两对基因敲入PCR 验证引物组合。
| (A) | ||
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图1. Genome-TALER™ 人类 AAVS1 safe harbor 基因敲入试剂盒。该试剂盒包含(A) 和 (B) 。(A) AAVS1 TALEN 及供体 DNA 质粒；(B) AAVS1 基因敲入验证 PCR 引物组合。
| 组成 | 描述 | 数量 |
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AAVS1 TALEN 组合 – AAVS1左侧 TALEN 及AAVS1右侧 TALEN |
特异剪切AAVS1靶标位点，产生双链断裂 |
1 对 |
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AAVS1 供体载体 或 AAVS1 供体克隆* |
用于克隆或已装载目标基因–两侧带有AAVS1同源重组位点 -含CMV启动子 -GFP报告基因/嘌呤霉素筛选标记 |
1 |
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AAVS1 阳性对照供体克隆 |
装载RFP而非目标基因。用作阳性对照。 |
1 |
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基因敲入验证引物组合 |
对同源重组连接位点进行扩增的PCR引物组合，用于验证成功整合的克隆 |
2 对 |
* 客户可另外搜索和订购感兴趣的 AAVS1 ORF 敲入克隆，或定制其他 AAVS1 供体克隆。该供体克隆可取代原来的空白AAVS1供体载体随试剂盒发货。
| (A) | (B) | |
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| (C) |
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| (D) | ||
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图2. 人类基因组 AAVS1 safe harbor 基因敲入(A) 于6孔板中用AAVS1 供体对照质粒DC-RFP-SH01 (800 ng) 与AAVS1 TALEN 克隆组合(600 ng 每个质粒) 或TALEN对照组共转染 HEK293T 感受态细胞. (B) 转染48小时后，将细胞以1：10比例分。配到新的6孔板，用1.0 µg/ml 浓度的嘌呤霉素进行筛选该图于筛选进行两周后拍摄。 DC-RFP-SH01 + TALEN对照组的板孔内只余极少量细胞。 (C) (D) 设计引物组合对同源重组连接位点进行扩增，验证成功整合的克隆。 |
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鸣谢: AAVS1 左侧及右侧TALEN克隆, 以及AAVS1 供体对照载体由美国国家卫生研究院再生医学中心的Dr. Jizhong Zou 设计。
GeneHero™ 人类 AAVS1 Safe Harbor 基因敲入试剂盒
试剂盒专为转基因实验设计，能通过 CRISPR-Cas9 介导的同源重组将您感兴趣的基因、筛选标记或其他遗传因子转入位于人类第19号染色体上的AAVS1 safe harbor位点。 试剂盒包含1个 AAVS1 sgRNA/Cas9 表达克隆，1个 AAVS1 供体克隆载体或供体克隆*，1个阳性对照供体克隆及两对基因敲入PCR 验证引物组合。
| (A) | |||
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| (B) | ||
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图3. GeneHero™ 人类 AAVS1 safe harbor 基因敲入试剂盒。该试剂盒包含(A) 和 (B) 。(A) AAVS1 sgRNA/Cas9 表达克隆及供体DNA质粒；(B) AAVS1 基因敲入验证PCR引物组合。
| 组成 | 描述 | 数量 |
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AAVS1 sgRNA/Cas9 表达克隆 |
表达 sgRNA 及 Cas9 核酸内切酶特异剪切 AAVS1 位点，生成双链断裂 |
1 |
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供体克隆载体 |
用于克隆或已装载目标基因–两侧带有AAVS1同源重组位点 -含CMV启动子 -GFP报告基因/嘌呤霉素筛选标记 |
1 |
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AAVS1 阳性对照供体克隆 |
装载RFP而非目标基因。用作阳性对照。 |
1 |
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基因敲入验证引物组合 |
对同源重组连接位点进行扩增的PCR引物组合，用于验证成功整合的克隆。 |
2 对 |
* 客户可另外搜索和订购感兴趣的 AAVS1 ORF 敲入克隆，或定制其他 AAVS1 供体克隆。该供体克隆可取代原来的空白AAVS1供体载体随试剂盒发货。
人类 AAVS1 Safe Harbor ORF 敲入克隆是装载客户感兴趣的基因 ORF 的 AAVS1 供体克隆。该供体克隆可搭配 Genome-TALER™ 或 GeneHero™ 人类 AAVS1 Safe Harbor 基因敲入试剂盒使用，将客户感兴趣的 ORF 特异敲入位于人类第19号染色体上的 AAVS1 位点。试剂盒中的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系靶向剪切 AAVS1 位点， 产生 DNA 双链断裂（DSB），使该位点发生同源重组（HR）。目前这一系列敲入克隆有超过20,000条序列确证的人类 OFR 可供选择。
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图4. 人类 AAVS1 Safe Harbor ORF 敲入克隆质粒图谱
图5. SOX2及OCT4基因敲入人类基因组safe harbor AAVS1 位点实验。（A）在六孔板上将OCT4(Cat#: DC-Z0092-SH01) 或SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 供体质粒与AAVS1 TALEN组合共转染到HEK293T细胞。转染48小时后细胞传代，以嘌呤霉素(1µg/ml)筛选2周。转染48小时或筛选2周后用显微镜(Nikon Eclipse Ti ) 检查CopGFP的表达情况。只用供体质粒转染的对照组在嘌呤霉素筛选后只有少量细胞存活（数据未展示）。（B）对AAVS1位点稳定整合SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 或 OCT4 (Cat#: DC-Z0092-SH01) 的HEK293T细胞进行分析。同个印迹实验中,阴性对照（未经转染的HEK293T细胞）的内源SOX2或OCT4蛋白水平低至无法检出。
AAVS1 供体克隆客户定制服务
GeneCopoeia 也提供 AAVS1 供体克隆客户定制服务，为客户构建含有突变基因或其他遗传因子的敲入克隆，用于针对 AAVS1 位点的基因敲入实验。请点击这里询价。
如有进一步疑问，请致信 sales@igenebio.com 或致电 4006-020-200 咨询。
AAVS1 供体克隆客户定制服务
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如有进一步疑问，请致信 sales@igenebio.com 或致电 4006-020-200 咨询。
AAVS1 稳转细胞株服务
| 服务 | 描述 | 应用 | ||
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稳转细胞株服务 |
单克隆细胞株 |
带有TALEN 或CRISPR-Cas9 介导的safe harbor 位点基因敲入单克隆稳转细胞株。 |
人类 AAVS1 |
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细胞库 |
为带有TALEN 或 CRISPR-Cas9 介导的 safe harbor 位点基因敲入单克隆稳转细胞株建库。 |
人类 AAVS1 |
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如有进一步疑问，请致信 sales@igenebio.com或致电 4006-020-200 咨询。
应用说明
GeneCopoeia genome editing tools for safe harbor integration in mice and humans
FAQs
Webinar
点击这里 观看网络讲座录像：《基因组编辑解决方案：TALEN、CRISPR-Cas9 及 safe harbor ORF 敲入克隆》
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文档
用户手册：
人类 AAVS1 safe harbor 用户手册（1.0版）
人类AAVS1 safe harbor CRISPR试剂盒用户手册（2.0版）
人类AAVS1 safe harbor TALEN试剂盒用户手册（2.0版）
MSDS: Genome-TALER™ Human AAVS1 safe harbor gene knock-in kit
小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入试剂盒
Genome-TALER™ 及 GeneHero™ 小鼠 ROSA26 safe harbor 基因敲入试剂盒 – 试剂盒能通过 TALEN 或 CRISPR-Cas9 介导，将您的目的基因、筛选标记或其他遗传因子特异敲入小鼠基因组中的 ROSA26 safe harbor 位点。这样的安全敲入能保证转入基因的转录活性，并对细胞无已知的副作用。
TALE 及 CRISPR-Cas9 基因组编辑工具
Genome-TALER™ TALEN 及 TALE-TF 客户定制服务 – GeneCopoeia提供TALENs,TALE-TFs和其他基于TALE的靶向基因组修饰因子的设计，构建和验证服务。服务层次选择丰富，价格合理。
GeneHero™ CRISPR-Cas9 产品及服务 – GeneCopoeia提供CRISPR-Cas9 sgRNA 设计及克隆服务，Cas9表达克隆和其他相关产品及服务，为客户实现简便快捷的靶向基因组编辑。
Cas9 稳定表达细胞系
预制 Cas9 稳定表达细胞系 (NEW) – GeneCopoeia 提供 Cas9 核酸酶的人类或小鼠稳定表达细胞系，如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被稳定整合到这些细胞系基因组上的 safe harbor 位点，为您的 CRISPR 基因组编辑应用提供一个方便、高效的工具。。
