产品介绍
GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换；其原理与 Gateway® 克隆技术相同。EZShuttle™ 重组克隆体系主要包含以下产品：
1. EZRecombinase™ Mixes：催化 attL x attR 和 attB x attP 重组反应。
2. pEZ™ 表达载体： 主要用于构建即用型表达克隆。
3. EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆：GeneCopeia 提供约 35,000 种人和小鼠的 EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭 克隆。
EZShuttle™ 重组克隆体系与 Gateway® 克隆技术完全兼容，如表1所示。
表1. GeneCopoeia's EZShuttle™ 重组克隆体系与 Gateway® 克隆技术完全兼容。
产品优势
• 由重组酶、表达载体和已验证 ORF 序列的穿梭克隆组成的一个完整的重组克隆体系；
• EZRecombinase™ LR Mix 和 EZRecombinase™ BP Mix 的活性高；
• 提供带有不同筛选标记和标签的 pEZ™ 表达载体，这些载体可用于基因克隆、基因编辑、蛋白质纯化和基因功能分析；
产品应用
• 构建即用型表达克隆：使穿梭克隆或其它 DNA 片段插入到表达载体。
• 蛋白质纯化：使目的基因在一个或多个系统中表达，然后用于蛋白质纯化、形成结晶、抗体的制备、DNA 结合化验等。
• 启动子交换：克隆目的基因到带有不同启动子的载体。
• 启动子分析：利用报告基因测试不同启动子的功能，例如：荧光素酶。
• 基因标签：表达不带标签或带有不同融合标签的目的基因，例如： 6XHis、Flag®、GFP 等；可用于免疫共沉淀或亚细胞 定位等。
EZShuttle™ 重组克隆体系原理
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GeneCopoeia 提供的 EZShuttle™ 重组克隆体系应用 E.coli 和 λ 噬菌体特异位点的重组酶促体系使 DNA 片段在载体间相互转换；其原理与 Gateway® 克隆技术相同（图1）。 |
图 1. E.coli 和 λ 噬菌体位点间的重组机制。
备注: Gateway® 是 Life Technologies 的注册商标。
Recombinase™ BP Mix
GeneCopoeia 提供的 EZRecombinase™ BP Mix 可以使 DNA 片段高效、快速的在相兼容的载体间转换。EZRecombinase™ BP mix 催化含有 attB 位点的 DNA 片段与含有 attP 位点的载体进行重组反应，生成新的 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone。
产品优点
- 高活性酶；
- 与现有的 Gateway® 克隆技术完全兼容；
EZShuttle™ BP重组技术
EZRecombinase™ BP mix 包含 Int 和 IHF，催化含有 attB 位点的 DNA 片段与含有 attP 位点的载体进行体外重组反应，生成新的 EZShuttle™ 或 Gateway® Entry clone。
将 attB-PCR产物或 Expression clone 与 pShuttle™ 载体混合，然后加入 EZRecombinase™ BP mix，室温（25℃）反应 1 小时后用于转化 E.coli 感受态细胞（图2）。
图2. 一步法将含有 attB 位点的 DNA 片段转移到 pShuttle™ 载体或 Gateway® pDONR ™ 载体。
pShuttle™ vectors
pShuttle™ 载体
GeneCopoeia 提供的pShuttle™载体用于生成新的带有attL位点的EZShuttle™ Gateway® PLUS 穿梭克隆或 Gateway® Entry clone。pShuttle-D01通过BP重组技术生成穿梭克隆；pShuttle-D02通过酶切-连接方法生成穿梭克隆；pShuttle-D03通过同源重组方法生成穿梭克隆，与本公司的Fast-Fusion™克隆试剂盒相匹配。
Expression clones
GeneCopoeia提供人和小鼠即时表达的全长ORF克隆，OmicsLink™即用型 ORF表达克隆可以在体内体外即时表达，帮助客户更迅速地得到研究结果，更快地发表文章。
满足生物化学和细胞生物学科研的诸多需求
- 可以在大肠杆菌、哺乳动物细胞和其他常见细胞中表达
- 可以在无细胞体系中正确表达和翻译
- 提供蛋白纯化和生产需要的
- 有不同功能的蛋白标签供选择
- 可制作原位杂交探针，用以检测组织或器官中基因的表达
- 可用于shRNA和miRNA抑制基因的功能拯救实验
高通量筛选
高质量的表达克隆组合是大规模筛选的最佳选择，已被广泛地应用到功能基因组学，蛋白组学和系统生物学的前沿领域。
严格的质量控制体系
OmicsLink™ 即用型ORF表达克隆的源于经过严格筛选的人和小鼠全长基因，通过多个渠道比对、验证基因序列及注释信息，进行人工纠正，减少冗余、错误的序列。
OmicsLink™ 即用型ORF表达克隆是由全长cDNA克隆和高质量的人体组织cDNA文库作PCR模板构建的。
这些经过严格质量验证OmicsLink™ 即用型ORF表达克隆在投递前都经过严格的质量检测：
- 所有的ORF经过全长测序
- PCR扩增验证长度
- 质粒通过了酶切验证
Read more – OmicsLink™ ORF cDNA brochure
Expression clone （即用型ORF表达克隆）
| GeneCopoeia提供40,000多种人和小鼠不同载体的即用型ORF表达克隆. |
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pShuttle™ 载体
Competent E. coli
Download competent cells datasheet for more information.
