您的位置: 首页 > 产品 > qPCR产品 >

NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®

—适用于Illumina 二代测序平台的文库定量试剂盒

产品介绍

NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®是一种基于 qPCR 方法对 Illumina 平台测序文库进行 DNA 分子数绝对定量分析的试剂盒。它可以对两端含有 Illumina P5、P7 芯片序列的各种类型 DNA 片段文库进行高特异性的快速定量,检测结果灵敏度高,准确度高,重复性好,适用于大多数qPCR仪器。

产品优势

  • 灵敏度高 —能检出低至 0.0002 pM 的文库样品;
  • 特异性强 —使用抗体修饰法热启动 DNA 聚合酶,避免了 PCR 扩增前的非特异性结合;文库定量引物采用特殊算法设计,不会形成引物二聚体;
  • 扩增范围广—能检测平均片段长度 1 kb 以内的文库;
  • 扩增效率高(E>0.92),实验重复性好(R2 >0.99)。

 

 

 

 

 

 

本试剂盒包含以下四种成分:

• 文库DNA定量标准品(qPCR DNA standard for Illumina):经过梯度稀释的六份十倍比梯度稀释的双链DNA片段溶液(20 pM-0.0002 pM),经过绝对定量和严格质控,用于标准曲线制作;

文库定量引物(qPCR primer Mix for Illumina):含有 Illumina P5,P7 芯片序列并经过优化设计的一对qPCR引物;

2×qPCR预混液(2× BlazeTaq™ NGS qPCR Mix):含有性能优化的抗体修饰法DNA聚合酶、qPCR反应缓冲液和SYBR Green染料等qPCR反应所需成分;

ROX参比染料(ROX Reference Dye)。

 

    

图1. DNA标准品扩增曲线与熔解曲线。使用NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®检测6个10倍梯度稀释的文库DNA定量标准品,每个标准品平行重复2次。结果显示,试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特性。


       

图2. 扩增产物电泳图。使用NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®扩增文库DNA标准品得到的qPCR产物,电泳分析无非特异扩增现象。


                                

图3.两款试剂盒中标准品的对比。将GeneCopoeia的NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®和KAPA Library Quantification Kits for Illumina platforms的标准品用BlazeTaq NGS qMix在ABI ViiA 7进行扩增。 两套标准品拟合出的标准曲线基本重合,对应浓度的标准品的△Ct<0.3。


           

图4:文库扩增效率: 对不同类型的10种illumina文库使用NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®分别检测,每个文库样本进行6个梯度的10倍稀释,计算出的扩增效率如上图显示,10个文库的扩增效率均在90%-110%的范围内,与扩增DNA标准品的效率相近。