—适用于Illumina 二代测序平台的文库定量试剂盒
NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®是一种基于 qPCR 方法对 Illumina 平台测序文库进行 DNA 分子数绝对定量分析的试剂盒。它可以对两端含有 Illumina P5、P7 芯片序列的各种类型 DNA 片段文库进行高特异性的快速定量，检测结果灵敏度高，准确度高，重复性好，适用于大多数qPCR仪器。
产品优势
- 灵敏度高 —能检出低至 0.0002 pM 的文库样品；
- 特异性强 —使用抗体修饰法热启动 DNA 聚合酶，避免了 PCR 扩增前的非特异性结合；文库定量引物采用特殊算法设计，不会形成引物二聚体；
- 扩增范围广—能检测平均片段长度 1 kb 以内的文库；
- 扩增效率高（E>0.92），实验重复性好（R2 >0.99）。
本试剂盒包含以下四种成分：
• 文库DNA定量标准品（qPCR DNA standard for Illumina）：经过梯度稀释的六份十倍比梯度稀释的双链DNA片段溶液（20 pM-0.0002 pM），经过绝对定量和严格质控，用于标准曲线制作；
• 文库定量引物（qPCR primer Mix for Illumina）：含有 Illumina P5，P7 芯片序列并经过优化设计的一对qPCR引物；
• 2×qPCR预混液（2×qPCR Mix for Illumina®）：含有性能优化的抗体修饰法DNA聚合酶、qPCR反应缓冲液和SYBR Green染料等qPCR反应所需成分；
• ROX参比染料（ROX Reference Dye）。
图1. DNA标准品扩增曲线与熔解曲线。使用NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®检测6个10倍梯度稀释的文库DNA定量标准品，每个标准品平行重复2次。结果显示，试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特性。
图2. 扩增产物电泳图。使用NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®扩增文库DNA标准品得到的qPCR产物，电泳分析无非特异扩增现象。
图3.两款试剂盒中标准品的对比。将GeneCopoeia的NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®和KAPA Library Quantification Kits for Illumina platforms的标准品用BlazeTaq NGS qMix在ABI ViiA 7进行扩增。 两套标准品拟合出的标准曲线基本重合，对应浓度的标准品的△Ct＜0.3。
图4：文库扩增效率: 对不同类型的10种illumina文库使用NGSquant™ Library qPCR Kit for Illumina®分别检测，每个文库样本进行6个梯度的10倍稀释，计算出的扩增效率如上图显示，10个文库的扩增效率均在90%-110%的范围内，与扩增DNA标准品的效率相近。
