Monthly Archives: 五月 2020

介绍一下Effectene Transfection Reagent(Qiagen)转染步骤

  转染试剂有很多的种类,不同的转染试剂都有不同的优缺点。我们在做实验时需要根据不同的情况选择合适的转染试剂。下面小编介绍一下Effectene Transfection Reagent(Qiagen) 转染步骤。   Effectene Transfection Reagent(Qiagen) 转染步骤:   以下步骤适用于在6孔培养板中转染贴壁细胞。起初,每个6孔培养板使用0.4 ug DNA。尽管DNA的数量似乎很少,但足以进行转染。为了获得高的转染效率,必须优化每个细胞系的转染条件。   1.转染前一天,将5ml含血清和抗生素的培养基等分,使每个6孔培养板含有2-8×105个细胞(取决于细胞类型)。   2.在正常培养条件下(通常为37°C和5%CO2)培养细胞。转染当天细胞应达到40-80%......
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DNAFect转染试剂使用的操作步骤及注意事项

  DNAFect是一种有效的阳离子脂质体转染试剂,适用于各种细胞的DNA转染。 大多数细胞系(包括原代细胞)具有高转染效率和非常低的细胞毒性。 转染试剂可用于瞬时转染,稳定转染,共转染,高通量DNA转染,基因表达和基因功能研究。   注意事项   1.转染试剂使用前应先震荡摇匀。   2.转染效率与细胞密度有很大关系。 在不同实验之间应保持基本的传代步骤,以确保细胞在转染过程中不会过度生长或处于静止状态。   通常,贴壁细胞转染的细胞密度为80-90%,悬浮细胞的细胞密度为3-5×10 5细胞/ ml。 转染的细胞密度是   3.转染应基于不同的时间。 根据类型或用途,请勿在培养基中添加抗生素。否则会引起细胞死亡。   操......
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永生化细胞系

永生化细胞系来源于原始细胞,绕过正常的细胞衰老过程,具有更长的寿命。原始细胞也可以通过各种病毒基因的过度表达而永生化,如猿类病毒的大t抗原(SV40)或端粒酶逆转录酶(hTERT)。 在细胞生物学研究中,永生化细胞是一种非常有用的工具,因为它们保留了原始细胞的许多特征,从而为研究提供了无限的同质细胞来源。 产品优势 即使在高代次,也能够维持细胞在体内的生物学特性 与原代细胞比较,基因表达基本不发生变化 减少实验结果的不一致性 没有批间差 成本低廉,容易培养 生长迅速,可用于提取大量蛋白质进行生化分析。               这些永生化的细胞株传代20多......
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Lipofectamine 2000转染试剂的转染步骤

  转染试剂是研究基因表达调控和突变分析的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。不同的转染试剂的实验转染步骤都是不同的。今天我们先给大家介绍一下Lipofectamine 2000转染试剂的具体转染步骤(24孔板)。   Lipofectamine 2000转染试剂的转染步骤(24孔板):   1.转染前一天,胰蛋白酶消化细胞并计数(0.5-2×105),铺板细胞,使转染当天的密度为90-95%。   2.对于每个孔,使用50 ul无血清培养基稀释0.8-1.0 ugDNA并轻轻混合。   3.使用前,轻轻混合Lipofectamine 2000转染试剂。用50ul无血清培养基(例如OPTI-MEM I培养基)稀释1-3ul Lipofectamine 2000转染试剂,并轻轻混合。用Lipofectamine 2000稀释后,......
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影响转染试剂的转染效率的几大因素

  转染技术是指将DNA和RNA等外来分子引入真核细胞的技术。它是研究基因表达调控和突变分析的常规工具。随着功能研究的兴起,其应用越来越广泛。下面介绍一些影响转染试剂转染效率的因素。转染试剂的转染效率受多种因素影响,主要因素如下:   细胞培养   健康的细胞培养是成功转染的基础。不同的细胞具有不同的培养基,血清和补充剂。低细胞数(<50)可以确保基因型保持不变。高转染效率需要一定的细胞密度,一般转染试剂会有特殊说明。   2.血清   大多数培养基在使用前需要血清。经常使用胎牛血清(FCS),应该使用马或牛血清。通常,血清是包含生长因子和其他辅助因子的不确定成分的添加剂,并且对不同细胞的生长具有非常......
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