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基因组编辑供体载体及克隆服务

——易于筛选,应用灵活

介绍

同源重组(HR)是一种修复 DNA 双链断裂(DSB)的自然机制。靶向特定位点的 TALEN 或 CRISPR-Cas9 体系能够在基因组上生成 DSB,触发 DNA 的自然修复机制,诱导基因组与供体 DNA 之间发生同源重组(HR),将供体DNA 片段整合到基因组上的靶标位点来修复 DSB。

这个过程对基因组编辑操作具有极大的价值。按照实验需求构建的各种供体质粒能在基因组序列中引入多种的修饰。研究者能通过整合报告基因或筛选标记干扰基因的编码区序列,达到基因敲除的目的,或通过敲入突变序列进行各种阅读框操作,或者在内源基因序列上融合标签以对基因进行追踪等等。(图1)

图1. 同源重组介导的基因组编辑。 通过CRISPR/TALEN工具制造DNA 双链断裂介导同源重组,将供体克隆上的报告基因和筛选标记表达结构靶向整合到基因组上的目标位点。

 

FAQ

基因组编辑常见问题

 

供体载体

GeneCopoeia 提供标准或客户定制的供体克隆载体,用于基因敲除、突变修饰、融合标签及其他方面的应用。我们提供带有不同元件的多种载体骨架,可供客户根据自己的实验需要进行选择。

  • 两个多克隆位点(MCS),用于装载左侧及右侧同源臂序列。
  • 含GFP(可选)等报告基因,用于阳性克隆细胞分选。
  • 含筛选标记,如嘌呤霉素和新霉素抗性基因,用于筛选阳性克隆。
  • 含TK 筛选标记(可选),用于负筛选去除含有随机整合的克隆。
  • 含 LoxP 位点(可选),方便在后续实验中通过Cre-LoxP重组去除整合到基因组中的筛选标记或报告基因序列。

 

载体 启动子 报告基因 筛选标记 LoxP 位点 载体图谱
pDonor-D01 EF1a copGFP Puromycin N/A get_info
pDonor-D02 CMV copGFP Neomycin N/A get_info
pDonor-D03 CMV N/A Neomycin N/A get_info
pDonor-D04 CMV N/A Puromycin N/A get_info
pDonor-D05 EF1a N/A Neomycin N/A get_info
pDonor-D07 EF1a copGFP Puromycin/TK LoxP get_info
pDonor-D08 CMV copGFP Neomycin/TK LoxP get_info
pDonor-D09 EF1a N/A Puromycin/TK LoxP get_info
pDonor-D10 CMV N/A Neomycin/TK LoxP get_info
pDonor-D11 PGK copGFP Puromycin/TK LoxP get_info
pDonor-D12 EF1a copGFP Hygromycin/TK LoxP get_info
pDonor-D13 PGK copGFP Neomycin/TK LoxP get_info
pDonor-D14 PGK N/A Puromycin/TK LoxP get_info

 

Buy Catalog Product Name Description Price
FFPC-C020 Fast-Fusion™ Cloning Kit (20 次反应) 快速有效地进行PCR产物克隆 1500
FFPC-C050 Fast-Fusion™ Cloning Kit (50 次反应) 快速有效地进行PCR产物克隆 3200


供体克隆服务

 

GeneCopoeia 也提供供体克隆设计及/或客户定制服务以及基因组编辑项目咨询服务。请填写以下表格询价。

 

基因敲除供体克隆

(图 2A)所示的供体克隆设计构建服务是用于同源重组介导的基因敲除。这类供体克隆能将筛选标记/报告基因表达结构敲入基因组上的靶点,既破坏了基因的阅读框达到敲除的目的,也使得药筛或荧光分选阳性细胞系成为可能。这种方法特别适合应用于转染效率偏低的细胞系,而且同源重组介导的基因敲除还有突变序列已知的优点。

 

用于条件性基因敲除、突变修饰和融合标签的供体克隆

(图 2B)所示的供体克隆设计构建服务是用于同源重组介导的基因敲入应用。这类应用包括1)条件性基因敲除(在外显子两端插入loxP位点,可利用Cre-loxP重组反应敲除该外显子);2)基因突变修饰(通过改变特定碱基突变野生型的基因,或将突变基因修复回野生型);3)基因融合标签(在基因的5‘或3’插入融合标签蛋白的基因)。此类供体克隆构建服务请填写以下表格询价。

 

A

 
 
   

B

 
 
 
图 2. GeneCopoeia提供的两种不同的供体克隆设计构建服务。A. 用于基因敲除的供体克隆设计示例。供体克隆带有药筛用的筛选标记(Puro)以及一个荧光报告基因(GFP)。药筛或荧光细胞分选方法适应用于转染效率偏低的细胞系。注:简明起见,图片仅展示一个等为基因。B. 用于突变修饰的基因敲入供体克隆设计示例。上部:带有单碱基突变的供体克隆与CRISPR sgRNA或TALEN共转染。一个筛选标记(Puro)和一个荧光报告基因(GFP)被敲入临近突变位点的内含子区。通过药筛或荧光细胞分选可以筛选出带有突变等为基因的克隆。

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