miRNA 3′ UTR 克隆

产品介绍

GeneCopoeia提供哺乳动物表达载体的人、小鼠、大鼠miRNA 3' UTR克隆,可用于miRNA靶标验证、预测靶标的功能确证和miRNA对靶标的调控作用的研究。

 

本公司提供两套3'UTR报告载体。在pEZX-MT05载体中,我们将3'UTR序列(来源于公开的基因序列数据库)插入到Gaussia荧光素酶报告基因下游,在哺乳动物细胞中由SV40启动子驱动转录生成Gaussia荧光素酶(Gluc)和3'UTR靶标序列的嵌合mRNA,因此无需裂解细胞实时监测Gluc的表达,研究mRNA-miRNA的相互作用。在相同载体(pEZX-MT05)上带有分泌型碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。CMV启动子驱动转录的SEAP作为同质粒内的对照,这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。

pEZX-MT06是Firefly/Renilla双荧光素酶报告载体。3'UTR序列在Firefly(hLuc)荧光素酶报告基因下游,CMV启动子驱动转录的Renilla(hRLuc)作为同质粒内的对照。通过裂解细胞检测hLuc和hRLuc的表达。

mirna target with luciferase reporter

 
            图1. miRNA 3' UTR克隆载体骨架

 

 

图2. 靶标序列(3' UTR)表达克隆中miRNA的抑制作用

已知LIN28基因是miR-125a的靶标。HEK 293细胞转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆(左)或者共转染miR-125a前体miRNA表达克隆(右)。转染24小时后检测GLuc 和内参SEAP活性。仅转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆的细胞中Gluc和SEAP活性之比定为1(左),以此确定共转样本中的比值。如图所示,miR-125a抑制了GLuc-LIN28-3'-UTR克隆中Gluc 70%以上的活性。

 

优势

 

可进行活细胞分析

  • 分泌型GLuc报告基因
  • 无需裂解细胞
  • 节省时间和样本,减少突变,简化试验流程

双报告载体系统

  • 可以对多样本常规转染进行精确比较

高通量兼容

  • 多个样本可同时分析

高灵敏度

  • GLuc比萤火虫或Renilla荧光素酶灵敏度高1000倍

使用方便

  • 所有靶标(3' UTR)克隆均可用于即时转染

载体与配套试剂盒

3' UTR 克隆载体及配套试剂盒

载体 报告基因 示踪基因 优势与特点 配套的分析试剂盒
pEZX-MT05 Gaussia luciferase Secreted alkaline phosphatase (SEAP) 适用于活细胞分析 Secrete Pair ™ Dual Luminiscence Assay Kit
pEZX-MT06 Firefly luciferase Renilla luciferase 需要裂解细胞 Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kitt

 
注意:
miRNA靶标验证使用GeneCopoeia提供的pEZX-MT05和pEZX-MT06靶标克隆,我们推荐使用Secrete-Pair™ Dual Luminescence Assay Kit和Luc-Pair™ miR Luciferase Assay Kit。点击这里获取更多克隆验证的信息。

订购

预制的3' UTR表达克隆

GeneCopoeia提供超过18,000种人、18,000种小鼠和10,000种大鼠不同载体的预制3’UTR表达克隆。

 

客户定制服务

需要定制3' UTR克隆? 请填写这里或发邮件到support@igenebio.com.

 

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 MiTarget™ MicroRNA 3' UTR Clone Cancellation, QA, License, and Warranty

 

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