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CytoCt™ RT-qPCR System

CytoCt™ RT-qPCR体系应用于试管或96孔板培养的10-100,000细胞基因表达水平的检测,该体系无需任何RNA纯化,操作更简便、快捷,灵敏度更高,实验数据更可靠。传统的方法是对培养细胞进行提取和纯化RNA,然后用RT-qPCR体系进行基因表达定量和分析。CytoCt™ RT-qPCR体系在96孔板或其他形式培养的细胞中制备细胞裂解物,无需RNA提取步骤,细胞裂解物通过two-step或者one-step RT-qPCR,在约1.5h即可完成基因定量检测。

GeneCopoeia提供的CytoCt™ RT-qPCR体系包括:CytoCt™ cell lysis buffer(只含裂解液)、CytoCt™ cDNA synthesis kit(含裂解液、cDNA合成试剂)和CytoCt™ One-Step RT-qPCR kits(含裂解液、一步法RT-qPCR试剂)。

产品优势

  • 操作简便:在96孔板或试管中快速地将细胞裂解,无需RNA提取,裂解物可直接进行基因定量检测
  • 灵敏度高可对10-100,000细胞裂解物进行有效的基因检测
  • 兼容性:CytoCt™ RT-qPCR系统兼容SYBR Green和Probe检测体系
  • 重复性实验步骤少,使得孔间的操作误差减少,实验结果具有更高的重复性

 

 

操作流程

将细胞培养到所需的细胞数,然后加入裂解液,在室温下孵育10分钟。转移到PCR板上,运行程序:25℃ 2分钟,37℃ 5分钟,75℃ 10分钟。裂解物可以直接进行RT-qPCR反应,或者储存起来以备将来使用。

 

简介

 

图一:CytoCt™ RT-qPCR体系的灵敏度(试管、96孔板)。A.在试管中的应用,使用GeneCopoeia、Ambion或BioRad的裂解缓冲液裂解HCT116细胞,使用GAPDH基因进行RT-qPCR分析。取浓度范围为5 ~ 5000个细胞每微升的悬浮细胞与裂解缓冲液混合,按照各产品的操作说明书进行处理。每RT-qPCR反应使用2µl细胞裂解液(相当于1-1000个细胞每反应)。                        B.在96孔板中的应用,H1299细胞接种于96孔板中,密度梯度为每孔250 ~ 5000个细胞。培养96小时后,每孔的最终细胞数估计约为2500~ 50000个细胞,向孔板中加入裂解缓冲液,按照操作说明书进行处理。每RT-qPCR反应使用2µl细胞裂解液(相当于10-200个细胞每反应)。

 

图二:使用常规RNA提取法及CytoCt™裂解法分别处理相同数量的细胞,通过One-Step RT-qPCR检测基因表达情况。每个反应的细胞量约为1500个。A. 检测HCT116细胞中的42个基因。B. 检测H1299细胞中的37个基因。

 

图三:使用Genecopoeia(纵坐标)和BioRad(横坐标)的lysis buffer分别处理相同数量的细胞,通过One-Step RT-qPCR检测基因表达情况。每个反应的细胞量约为1500个。A. 检测HCT116细胞的43个基因。B. 检测H1299细胞中的37个基因。

 

四:在96孔板使用细胞裂解液进行多基因检测。将3000 – 5000个HEK293细胞接种在96孔板中培养,至细胞达到70% – 90%的丰度。分别使用GeneCopoeia、BioRad的裂解液以及RNA提取试剂按使用说明处理等量细胞,使用一步法RT-qPCR试剂,检测8个基因的表达。