• 易锦生物提供的全部人、小鼠和大鼠ORF 克隆及其慢病毒、AAV 颗粒与重组蛋白均使用基于毛细管电泳的 Sanger 法“金标准”全长测序,保证氨基酸序列与NCBI 数据库一致。
    All human and mice ORF clones and related Lentivirus, AAV particles and recombinant proteins provided by iGeneBio are fully sequenced using Sanger sequencing by capillary electrophoresis and Amino Acid Sequences are guaranteed to be matched with NCBI database.
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人类 及小鼠 Safe Harbor ORF 敲入克隆

AAVS1 Cas9 knock-in clone
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Cas9 knock-in clone to ROSA26
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简介

Safe Harbor ORF敲入克隆能通过TALEN或CRISPR介导的同源重组(HR),将客户感兴趣的基因ORF从供体克隆整合到人类或小鼠基因组的safe harbor位点。该供体克隆可搭配Safe Harbor 基因敲入试剂盒使用。试剂盒中的TALEN或CRISPR克隆能靶向剪切人类AAVS1或小鼠ROSA26 safe harbor位点,生成DNA双链断裂(DSB),在该位点诱发同源重组(HR)修复机制(图1)。目前这一系列敲入克隆有超过20,000条序列确证的人类ORF和超过20,000条序列确证的小鼠ORF可供选择。

 

 

图1: 基因组编辑工具介导的 safe harbor 基因敲入原理图

 

(A)
(B)

图2. (A)人类 AAVS1 Safe Harbor ORF 敲入克隆;(B)小鼠ROSA26 Safe Harbor ORF 敲入克隆。

sy_20111121223148224632

未命名

图6:以SOX2及OCT4为敲入基因的人类基因组AAVS1 safe harbor位点基因敲入实验。

(A)在六孔板上将OCT4(Cat#: DC-Z0092-SH01) 或SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 供体质粒与AAVS1 TALEN组合共转染到HEK293T细胞。转染48小时后细胞传代,以嘌呤霉素(1µg/ml)筛选2周。转染48小时或筛选2周后用显微镜(Nikon Eclipse Ti ) 检查CopGFP的表达情况。只用供体质粒转染的对照组在嘌呤霉素筛选后只有少量细胞存活(数据未展示)。

(B)对AAVS1位点稳定整合SOX2(Cat#: DC-T2547-SH01) 或 OCT4 (Cat#: DC-Z0092-SH01) 的HEK293T细胞进行分析。同个印迹实验中,阴性对照(未经转染的HEK293T细胞)的内源SOX2或OCT4蛋白水平低至无法检出。

 

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