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细胞永生化慢病毒

        原代细胞经过一定数量的增殖,和一定次数的分裂后达到复制衰老的状态,从而限制了衰老或受损细胞的增殖。GeneCopoeia提供细胞永生化试剂,利用重组慢病毒携带基因,如simian virus 40 (SV40)大T抗原和人端粒酶逆转录酶蛋白(hTERT)诱导永生化,可显著延长原代细胞的寿命。

        GeneCopoeia Lentifect™ 纯化慢病毒生产经过标准的实验流程,使用高质量质粒DNA提取试剂盒、EndoFectin™ 转染试剂及TiterBoost™ 慢病毒滴度增强试剂。使用第三代自失活包装系统,符合2级生物安全等级的要求。

1. 永生化慢病毒由CMV/EF1α启动永生化诱导基因的有效表达,并带有筛选抗性(可选)。

2. 提供25 μl*4管约10TU/ml的慢病毒。慢病毒进行干冰寄送,请收到后立即放到-80℃保存。避免反复冻融影响病毒滴度。

3. 慢病毒表达结构经过全长测序、酶切、用基因特异性引物和载体特异性引物进行PCR大小验证。慢病毒产品无细菌、真菌及常见支原体污染。

 

SV40 large T antigen

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP723-100 SV40大T抗原-Lv115 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl EF1a Hygro
LP724-100 SV40大T抗原-Lv153 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A
LP725-100 SV40大T抗原-Lv156-01 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl EF1a N/A
LP742-100 SV40大T抗原-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP743-100 SV40大T抗原-Lv156 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl EF1a Puro

SV40 small T & large T antigen

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP721-100 SV40大T&小T抗原-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP722-100 SV40小T&大T抗原-Lv156 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl EF1a Puro

hTERT

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP726-100 hTERT-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP727-100 hTERT-Lv115 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl EF1a Hygro
LP728-100 hTERT-Lv152 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Hygro
LP729-100 hTERT-Lv153 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A
LP730-100 hTERT-Lv156 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl EF1a Puro
LP744-100 hTERT-Lv156-01 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl EF1a N/A

c-Myc

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP741-100 c-Myc-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml c-Myc 纯化慢病毒颗粒,可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro

CDK4

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP731-100 CDK4带嘌呤霉素标记-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP732-100 CDK4-Lv153 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A

HOX

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP733-100 HOXB8带嘌呤霉素标记-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP734-100 HOXB8-Lv153 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A
LP735-100 HOXA9带嘌呤霉素标记-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP736-100 HOXA9-Lv153 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A
LP737-100 HOXA10带嘌呤霉素标记-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP738-100 HOXA10-Lv153 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A

Bmil

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP739-100 Bmi1带嘌呤霉素标记-Lv105 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP740-100 Bmi1-Lv153 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A

HPV-16 E6/E7

购买 货号 产品 类型 描述 启动子报告/标记价格(¥)
LP745-100 HPV-16 E6-E7带嘌呤霉素标记 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV Puro
LP746-100 HPV-16 E6-E7 Lentifect™ 慢病毒颗粒
(25 µl x 4 管)
Standard ≥ 108 TU/ml 可直接用于转导实验, 100 µl CMV N/A

 

 

细胞永生化实验操作

  • 原代细胞铺板,6孔板,0.5-2 x105/孔
  • 将冻存在-80℃的慢病毒取出,冰浴融化
  • 使用GFP慢病毒感染原代细胞,明确细胞MOI,以及明确细胞药物筛选最小致死浓度后,使用永生化慢病毒感染细胞。
  • 感染第二天,更换新鲜细胞培养液,继续培养。
  • 感染72小时后,更换带有筛选抗性的新鲜细胞培养液,继续培养。
  • 得到筛选抗性阳性细胞克隆后,即可进行永生化测试。