• 复能易锦提供的全部人类和小鼠ORF克隆及相关慢病毒和AAV病毒,所提供的载体质粒均采用毛细管电泳sanger全长测序验证,并承诺编码的氨基酸序列与NCBI数据库匹配。
    All human and mice ORF clones and related Lentivirus, AAV particles and recombinant proteins provided by iGeneBio are fully sequenced using Sanger sequencing by capillary electrophoresis and Amino Acid Sequences are guaranteed to be matched with NCBI database.
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GeneCopoeia 转染试剂助力Science人类早期胚胎发育机制研究

文章标题:

Endogenous retroviruses synthesize heterologous chimeric RNAs to reinforce human early embryo development

文章链接:

www.science.org/doi/10.1126/science.adv5257

期刊:Science

影响因子:45.8

产品引用:复能易锦(GeneCopoeia)为本研究提供EndoFectin™ Max转染试剂(货号:EF013)。该试剂具有多种细胞的广泛通用性,经优化设计,在多种常用细胞系中表现优良,具有较高转染效率。感兴趣的研究人员可以与我们联系。

 

近期,中国科学家团队在 Science 发表突破性研究,首次揭示了内源性逆转录病毒亚家族 MLT2A1 是人类ZGA的核心驱动力。它通过合成独特的嵌合RNA,构建起一个自我放大的转录网络,从而避免胚胎在8细胞期发生阻滞。文中详细记录了使用 复能易锦(GeneCopoeia) EndoFectin™ 转染试剂 完成的以下三个关键实验。这充分证明了 EndoFectin™ 在干细胞及难转染细胞模型中,具有优异的转染效率和极低的细胞毒性,能够满足顶级期刊对数据质量的严苛要求。

关键实验方法拆解:高效转染助力功能验证

  • 实验场景一:功能获得性过表达实验 —— 证明“充分性”

实验目的: 验证MLT2A1嵌合RNA是否能够激活ZGA相关基因。

操作细节:通过体外转录(IVT)制备 MLT2A1 嵌合RNA(dup_161/dup_2477)及对照 GFP mRNA。在人类胚胎干细胞(hESCs)中,使用 EndoFectin™ 转染试剂 将 1.6 μg 的目标RNA高效转入细胞。转染48小时后进行转录组测序。

实验结论: 与对照组相比,过表达 MLT2A1 嵌合RNA 后,hESCs 中 LEUTX、TPRX1 等关键 ZGA 基因表达显著上调。

  • 实验场景二:荧光素酶报告系统 —— 解析分子机制

实验目的: 深入探究 MLT2A1 嵌合RNA 是如何精准靶向并激活基因的。

操作细节:将嵌合RNA的 3’端融合序列克隆到荧光素酶基因上游作为启动子。 将构建好的报告质粒与不同的 RNA(完整嵌合RNA、仅5’端、仅3’端)共转染 到 hESCs 中。

实验结论: 只有转染完整的嵌合RNA才能有效激活报告基因,其5’端和3’端部分协同作用、缺一不可。

  • 实验场景三:挽救实验—— 排除脱靶效应

实验目的: 验证 ASO 敲低导致的 ZGA 缺陷是否真的由 MLT2A1 缺失引起,排除工具脱靶嫌疑。

操作细节:改造 MLT2A1 序列(截短或点突变),使其成为功能正常但“ASO 无法识别”的 不可靶向版本。 在 8C-like 细胞中,使用 EndoFectin™ 转染试剂 将靶向内源 MLT2A1 的 ASO 与外源 “不可靶向”的嵌合RNA 进行共转染。

实验结论: 引入外源嵌合RNA后,ZGA 基因的表达缺陷得到了显著恢复,强有力地证明了 MLT2A1 调控作用的高度特异性。

顶刊之选:为什么选择 EndoFectin™ Max?

EndoFectin™ Max是基于脂质体转染原理的转染试剂,该试剂具有多种细胞的广泛通用性,经优化设计,在多种常用细胞系中表现优良,具有较高转染效率。在上述发表于 Science 的高难度实验中,无论是递送 长链 mRNA、质粒 DNA 还是 短链 ASO,EndoFectin™ Max 都展现了卓越的性能。

对于干细胞(hESCs)及原代细胞模型研究者而言,EndoFectin™ Max 具备三大核心优势:

  • 多能适配,一剂多用: 完美支持 DNA / mRNA / siRNA / ASO 等多种核酸分子的共转染(如实验三中的 ASO+RNA 共转),简化实验条件的摸索。

  • 难转染细胞的克星: 在 hESCs 和 8C-like 细胞中依然保持高转染效率,确保过表达或敲低效果显著。

  • 极低毒性,呵护细胞: 发育生物学研究对细胞状态要求极高。EndoFectin™ Max 温和的配方最大程度维持了细胞的生理活性,避免因转染毒性导致的非特异性表型干扰。

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