产品介绍 The Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit是一款稳定的适用于高通量分析的双荧光素酶检测试剂盒，提供的试剂可直接用于培养基中的细胞，无需预处理或预裂解细胞，能够快速简便地检测萤火虫（ Firefly luciferase ，FLuc）和海肾（Renilla luciferase ，Rluc）荧光素酶的活性。本试剂盒适用于 96 孔和 384 孔板进行细胞培养的大多数哺乳动物细胞培养基，适用于 GeneCopoeia 及 Promega 的萤火虫和海肾荧光素表达载体。

产品特点

• 稳定性高 — 本产品对萤火虫和海肾荧光素酶产生的光信号很稳定，半衰期可达2小时（见图1），很适合用于高通量分析。

• 简便快速 — 本产品已经优化用于多种培养基（见图2），无需预先进行细胞裂解，即可进行荧光素酶活性检测。

• 适用范围广 — 适用于多种不同的哺乳动物细胞系样品在微孔板（如 96-孔板，384-孔板）中检测。

• 背景值低 — 背景更低，数据更准确；

• 操作简便 — 海肾荧光素酶反应液包含了萤火虫荧光素酶的淬灭剂（见图3）终止萤火虫荧光素酶发光，同时启动海肾荧光素酶反应，只需两步实验；

• 重复性好 — 检测数据更可靠，且荧光素酶的浓度线性范围超过 9 个数量级。

 

图1. 使用GeneCopoeia 的 Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit检测萤火虫和海肾荧光素酶的活性。用Promega的pGL4.13和pGL4.75 报告载体转染HEK293细胞，转染48小时之后分别检测荧光信号，结果如上图显示。Fluc-GCI和Rluc-GCI分别代表GeneCopoeia品牌试剂盒检测Fluc和Rluc的结果，Fluc-Prmg和Rluc-Prmg分别代表Promega品牌试剂盒检测Fluc和Rluc的结果。

 

图2. 使用GeneCopoeia 的 Luc-Pair™ Duo-Luciferase HT Assay Kit在不同培养基中检测萤火虫和海肾荧光素酶的活性。用Promega的pGL4.13和pGL4.75 报告载体转染HEK293细胞48小时之后，收集5×104 个细胞悬浮于无血清的DMEM，或者包含10%血清的DMEM, RPMI1640, EMEM, IMDM, McCoy’s5A, F-12K, MEBM, ACL-4, L15, Cho-S-SFMII, NCTC109。按照实验操作说明分别检测Fluc和Rluc的荧光信号，结果如上图显示。

 

图3. 萤火虫荧光素酶的活性被 Luc-HT Buffer II 淬灭。用Promega的pGL4.13和pGL4.75 报告载体转染HEK293细胞48小时之后，检测Fluc的荧光信号（左柱）。然后把不包含底物（中间柱）或包含底物（右柱）的1 x Luc Buffer II加入到测试孔，重新检测Fluc的荧光值，大约99.9%的萤火虫荧光素酶的荧光被淬灭。