GeneHero™ CRISPR-Cas9 产品与服务

GeneHero™ sgRNA设计与克隆定制服务

GeneCopoeia为客户感兴趣的基因提供sgRNA（single-guide RNA）设计与克隆定制服务。sgRNA克隆表达一个单链的融合sgRNA（由crRNA和tracrRNA融合而成）。当Cas9核酸酶存在时，sgRNA能识别靶标DNA序列并引导Cas9核酸酶剪切靶标位点，形成DNA双链断裂（DSBs），进而实现基因敲除、敲入及突变等基因组编辑。多个sgRNA克隆与一个Cas9克隆共转染可同时在基因组中编辑多个位点，使实验设计更高效、更灵活。

sgRNA载体类型

货号	载体	启动子	sgRNA	是否含有Cas9核酸酶基因	筛选标记/报告基因	载体图谱	价格(¥)
SG001	pCRISPR-SG01	U6	1 或多个	无，Cas9克隆单独出售*	Hygromycin		3960
SG002	pCRISPR-LvSG03	U6	1 或多个	无，Cas9克隆单独出售*	Puromycin / mCherry		3960
SG012	pCRISPR-CG02	U6	1	有，载体含有CBh启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	N/A		3960
SG013	pCRISPR-CG04	U6	1或多个	有，载体含有CMV启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	Neomycin / copGFP		3960
SG014	pCRISPR-CG07	U6	1	有，载体含有CBh启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	copGFP		3960
SG015	pCRISPR-CG08	U6	1	有，载体含有CBh启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	mCherry		3960
—	pCRISPR-CG12	U6	1或多个	有，载体含有CMV启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	Neomycin / mCherry		—
—	pCRISPR-LvSG06	U6	1或多个	有，载体含有EF1a启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	Puromycin		—
—	pCRISPR-LvSG09	U6	1或多个	有，载体含有EF1a启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	Puromycin / eGFP		—
—	pCRISPR-LvSG10	U6	1或多个	有，载体含有EF1a启动子启动表达的Cas9核酸酶基因	Hygromycin		—

*配合单独表达Cas9 核酸酶 (Cat.No. CP-C9NU-01, CP-LvC9NU-01, CP-LvC9NU-02, CP-LvC9NU-08, CP-LvC9NU-09, CP-LvC9NU-10) 或 Cas9 D10A 切口酶 (Cat.No.CP-C9NI-01, CP-C9NI-02) 的 Cas9 克隆使用。

点击 获取单靶点或多靶点sgRNA设计和克隆服务的报价。

(A)
(B)
图4. HUWEI-sgRNA/Cas9靶向HEK293T细胞中的HUWEI基因。（A）HUWEI-sgRNA与基因组PCR引物设计；（B）在6孔板中，HUWEI-sgRNA/Cas9克隆与sgRNA/Cas9对照克隆（泳道2）转染HEK293T细胞。转染40h后收集细胞，提取基因组DNA并用HUWE特异的PCR引物进行PCR扩增，凝胶纯化PCR产物，将纯化后的产物与缓冲液混匀，经变性、退火后在37℃水浴下T7 ENI剪切60min。HUWEI经PCR后的产物片段长度应为520bp，T7 ENI剪切后的产物应分别为330bp和190bp。

图5. CRISPR-Cas9多重靶向编辑多个基因。实验组（1-4泳道）为Cas9表达克隆及分别表达靶向p53, HUWE1, NCL3 和 GFP基因的sgRNA克隆质粒共转染HEK293t GFP稳转细胞。对照组（5-8泳道）为Cas9表达克隆质及随机sgRNA表达克隆的质粒共转染HEK293t GFP稳转细胞。通过T7核酸内切酶检测分析基因组DNA各个靶点上同时存在的插入缺失。*号标记的条带显示Cas9核酸酶及分别靶向多个靶点的sgRNA都在目标靶点上有效地诱发了插入缺失突变（1-4道）。PCR产物条带及T7核酸内切酶酶切产物条带大小：GFP: 720bp (完整), 340bp + 380bp (酶切); NCL3: 765bp (完整), 295bp +470bp (酶切); HUWE: 520bp (完整), 190bp + 330bp (酶切); P53: 825bp (完整), 475bp + 350bp (酶切).

GeneHero™ Cas9 核酸酶及 D10A 切口酶表达克隆

Cas9核酸酶克隆表达按照人类密码子优化过的Cas9核酸酶基因。Cas9切口酶克隆表达一个Cas9 D10A 切口酶基因。该切口酶是一个Cas9突变体，第10位氨基酸从野生型的天冬氨酸突变成了丙氨酸。

CRISPR-Cas9体系是由sgRNA和Cas9核酸酶构成的DNA靶向识别剪切复合体。sgRNA识别一段20bp、3端紧接着5′-N-G-G-3′ PAM位点的DNA靶序列，Cas9核酸酶在该靶序列上生成DNA双链断裂（DSB）。DNA双链断裂（DSB）会被细胞的非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HR）机制修复。NHEJ机制容易在修复的断裂位点引入插入/缺失突变，造成阅读框移码而产生基因敲除的效果。同源重组（HR）需要细胞内同时存在一段带有靶点同源序列的供体DNA作为修复模板，我们可以通过对供体DNA进行设计，在众多实验体系中实现基因敲除或者敲入突变修饰、报告基因等等一系列基因组修饰。

Cas9 D10A切口酶跟野生型的Cas9一样，也使用sgRNA识别靶序列。但Cas9 D10A切口酶在靶序列上生成的是单链切口而非双链断裂。单链切口通常会由NHEJ和HR以外的机制完美地修复。但通过设计一对定向正确的sgRNA分别识别靶点两侧的DNA双链，我们可以诱导Cas9 D10A分别在靶点两侧的DNA双链上各生成一个单链切口，构成一个双链断裂（DSB），进而诱导NHEJ或HR修复机制。这种双切口策略常被用在要求低脱靶率的实验设计中。

订购	货号	产品	启动子	报告基因/筛选标记	价格（￥）
Cas9核酸酶表达克隆
	CP-C9NU-01	Cas9核酸酶表达克隆	CMV	mCherry / Neomycin	1000
Cas9核酸酶慢病毒表达克隆
	CP-LvC9NU-01	Cas9核酸酶慢病毒表达克隆	CMV	Neomycin	1000
	CP-LvC9NU-02	Cas9核酸酶慢病毒表达克隆	CMV	eGFP / Neomycin	1000
	CP-LvC9NU-08	Cas9核酸酶慢病毒表达克隆	EF1a	Puromycin	1000
	CP-LvC9NU-09	Cas9核酸酶慢病毒表达克隆	EF1a	eGFP / Neomycin	1000
	CP-LvC9NU-10	Cas9核酸酶慢病毒表达克隆	EF1a	eGFP / Hygromycin	1000
Cas9 D10A 切口酶表达克隆
	CP-C9NI-01	Cas9 D10A 切口酶表达克隆	CBh	N / A	1000
	CP-C9NI-02	Cas9 D10A 切口酶表达克隆	CMV	mCherry / Neomycin	1000
sgRNA克隆
	多种	sgRNA克隆	多种	多种

* 同时订购sgRNA克隆时，Cas9表达克隆的价格减为￥500

Cas9 核酸酶预制慢病毒

订购	货号	产品	描述	启动子	筛选标记/报告基因	载体	价格(￥)
	LP601-100	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，100 µL	CMV	Neomycin	CP-LvC9NU-01	4500
	LP602-100	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	1×106 – 1×107 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，100 µL	CMV	eGFP/Neomycin	CP-LvC9NU-02	4500
	LP603-100	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，100 µL	EF1α	Puromycin	CP-LvC9NU-08	4500
	LP604-100	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，100 µL	EF1α	eGFP/Neomycin	CP-LvC9NU-09	4500
	LP605-100	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，100 µL	EF1α	eGFP/Hygromycin	CP-LvC9NU-10	4500
	LP601-400	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，400 µL	CMV	Neomycin	CP-LvC9NU-01	7000
	LP602-400	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	1×106 – 1×107 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，400 µL	CMV	eGFP/Neomycin	CP-LvC9NU-02	7000
	LP603-400	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，400 µL	EF1α	Puromycin	CP-LvC9NU-08	7000
	LP604-400	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，400 µL	EF1α	eGFP/Neomycin	CP-LvC9NU-09	7000
	LP605-400	Cas9 核酸酶纯化 Lentifect™ 慢病毒颗粒	不低于108 TU/ml Cas9 核酸酶慢病毒颗粒，转导级，400 µL	EF1α	eGFP/Hygromycin	CP-LvC9NU-10	7000

GeneHero™ Cas9蛋白

User Manual
Technical Note

GeneHero™ Cas9 稳定表达细胞系

GeneCopoeia 提供 Cas9 核酸酶的稳定表达细胞系。这些细胞系能为您的 CRISPR 基因组编辑应用提供一个方便、高效的工具。

我们会提供预制的GeneHero™ Cas9 人类或小鼠稳定表达细胞系，如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被稳定整合到这些细胞系基因组上的 safe harbor 位点。此外，我们也能将 Cas9 核酸酶基因稳定整合到您所指定的细胞系基因组。

更多产品信息，请访问我们的Cas9稳定表达细胞系产品页面。

GeneCopoeia 也提供稳定细胞系构建服务。稳定细胞系构建服务请联系以下邮箱inquiry@igenebio.com，或填写以下表格。

CRISPR-Cas9 客户定制服务

GeneCopoeia提供基于CRISPR-Cas9体系的靶向基因组修饰因子的设计，构建和验证服务。

优点

相关服务

供体载体类型

载体	启动子	报告基因	筛选标记	LoxP 位点	载体图谱
pDonor-D01	EF1a	copGFP	Puromycin	N/A
pDonor-D02	CMV	copGFP	Neomycin	N/A
pDonor-D03	CMV	N/A	Neomycin	N/A
pDonor-D04	CMV	N/A	Puromycin	N/A
pDonor-D05	EF1a	N/A	Neomycin	N/A
pDonor-D07	EF1a	copGFP	Puromycin/TK	LoxP
pDonor-D08	CMV	copGFP	Neomycin/TK	LoxP
pDonor-D09	EF1a	N/A	Puromycin/TK	LoxP
pDonor-D10	CMV	N/A	Neomycin/TK	LoxP
pDonor-D11	PGK	copGFP	Puromycin/TK	LoxP
pDonor-D12	EF1a	copGFP	Hygromycin/TK	LoxP
pDonor-D13	PGK	copGFP	Neomycin/TK	LoxP
pDonor-D14	PGK	N/A	Puromycin/TK	LoxP

•  IndelCheck™ CRISPR/TALEN 插入缺失检测体系及染色体水平功能验证服务 – GeneCopoeia 开发的 IndelCheck™ CRISPR/TALEN 插入缺失检测体系能用于 CRISPR/TALEN 的染色体水平功能验证及基因敲除细胞系筛选。我们同时也提供提供 CRISPR/TALEN 染色体水平功能验证服务。
• Genome-TALER™ TALEN和TALE-TF定制服务 – GeneCopoeia提供多层次的TALENs,TALE-TFs和其他基于TALE的靶向基因组修饰工具的设计，构建和验证服务。
• 供体克隆定制及载体服务– GeneCopoeia提供标准或客户定制的供体克隆载体，用于基因敲除、突变修饰、融合标签及其他方面的应用。我们提供带有不同元件的多种载体骨架，可供客户根据自己的实验需要进行选择。
• 基因组编辑稳定细胞系构建服务 – GeneCopoeia提供使用TALEN或CRISPR-Cas9技术构建的基因组编辑稳定细胞系。我们的稳定细胞系服务也可以兼容我们的人类及小鼠safe harbor基因敲入体系。
• Genome-TALER™ 及 GeneHero™ 人类 AAVS1 Safe Harbor 基因敲入试剂盒及敲入克隆——试剂盒能通过 TALEN 或 CRISPR-Cas9 介导，将您的目的基因、筛选标记及其他遗传因子特异敲入人类第19号染色体上

用户手册

GeneHero™ CRISPR-Cas9 用户手册

FAQs

基因组编辑常见问题及CRISPR FAQs

Protocols

• CRISPR Protocol 1: Gene Knockout Without Donor
• CRISPR Protocol 2: HDR Donor Plasmid Applications (gene knockout, gene mutagenesis, gene tagging, Safe Harbor ORF knock-in)

技术说明

• • Knockout By TALEN Or CRISPR vs. Knockdown By shRNA or siRNA
  • CRISPR-Cas9 Specificity: Taming Off-target Mutagenesis
  • Genome Editing: Which Should I Choose, TALEN Or CRISPR?
  • Genome Editing In Mammalian Cells: What Do I Do Next?
  • Genome Editing: HDR Donors For Gene Knockout, Mutagenesis, Tagging, and Safe Harbor Knock-in
  • Genome Editing: Applications For GeneCopoeia CRISPR sgRNA Libraries
  • IndelCheck^™: A Powerful CRISPR/TALEN Validation & SCreening Tool
  • Genome Editing: Cas9 Stable Cell Lines for CRISPR sgRNA Validation, Library Screening, and More

已发表文献

• Schuler, B., et al. (2023). Host Lipid Transport Protein ORP1 Is Necessary for Coxiella burnetii Growth and Vacuole Expansion in Macrophages. mSphere doi: 10.1128/msphere.00104-23 [GeneHero™ sgRNA expression clones targeting OSBPL1A]

• Pal, D., et al. (2023). H4K16ac activates the transcription of transposable elements and contributes to their cis-regulatory function. Nat Struct Mol Biol doi: 10.1038/s41594-023-01016-5 [GeneHero™ human AAVS1 safe harbor gene knockin kit]
• Naoki, I-T., et al. (2023). The Src-Family Kinases SRC and BLK Contribute to the CLDN6-Adhesion Signaling. Cells doi: 10.3390/cells12131696 [GeneHero™ sgRNA clones targeting mouse Blk; GeneHero™ sgRNA clones targeting mouse Scr]
• Talic, E-S., et al. (2023). RNA Methyltransferase METTL16’s Protein Domains Have Differential Functional Effects on Cell Processes. Curr Issues Mol Biol doi: 10.3390/cimb45070346 [GeneHero™ sgRNA control; GeneHero™ METTL16 Cas9-expressing clone]
• Wan, Y., et al. (2023). Nonmonotone invasion landscape by noise-aware control of metastasis activator levels. Nat Chem Biol doi: 10.1038/s41589-023-01344-z [GeneHero™ human AAVS1 safe harbor gene knock-in kits and clones]
• Schwarz, A.M., et al. (2023). Terpenes from Cannabis sativa Induce Antinociception in Mouse Chronic Neuropathic Pain via Activation of Spinal Cord Adenosine A2A Receptors. bioRxiv doi: 10.1101/2023.03.28.534594 [GeneHero™ Cas9-expressing clone]
• Li, C., et al. (2023). SUMO Proteomics Analyses Identify Protein Inhibitor of Activated STAT-Mediated Regulatory Networks Involved in Cell Cycle and Cell Proliferation. J Proteome Res doi: 10.1021/acs.jproteome.2c00557 [GeneHero™ PIAS1、PIAS2、PIAS3、PIAS4 sgRNA clones and negative control]
• Qin, Q., et al. (2023). CNTNAP4 signaling regulates osteosarcoma disease progression. NPJ Precis Oncol doi: 10.1038/s41698-022-00344-x [T7 Endonuclease I Assay Kit; SuperCut™ Nuclease]
• Lin, P., et al. (2023). TRAF6 regulates the abundance of RIPK1 and inhibits the RIPK1/RIPK3/MLKL necroptosis signaling pathway and affects the progression of colorectal cancer. Cell Death Dis doi: 10.1038/s41419-022-05524-y [GeneHero™ Cas9-expressing clone]
• Atobatele, A.G., et al. (2023). Canonical and truncated transglutaminase-2 regulate mucin-1 expression and androgen independency in prostate cancer cell lines. Cell Death Dis doi: 10.1038/s41419-023-05818-9 [GeneHero™ TGM2 sgRNA clones]