| GeneCopoeia 提供 Cas9 核酸酶的稳定表达细胞系。这些细胞系能为您的 CRISPR 基因组编辑应用提供一个方便、高效的工具。
我们会提供预制的GeneHero™ Cas9 人类或小鼠稳定表达细胞系，如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被稳定整合到这些细胞系基因组上的 safe harbor 位点（图1）。此外，我们也能将 Cas9 核酸酶基因稳定整合到您所指定的细胞系基因组。 Cas9 核酸酶与 sgRNAs 这个组合被广泛用于在真核细胞乃至动物模型上生成靶向基因组修饰，包括基因敲除、突变修饰、内源基因融合标签以及更多其他应用。而基因组上的 safe harbor 位点整合了 Cas9 基因的单克隆人类细胞系能保证该基因表达的安全性、可靠性以及持续性。 |
优势
- Cas9 稳定整合将 sgRNA 共转染或共转导操作的需求降到最低，是高通量 sgRNA 应用的理想选择。
- Safe Harbor 位点整合能确保稳定的 Cas9 表达，同时对细胞无副作用。
- 单克隆细胞系能保证单一基因背景下持续的、高水平的 Cas9 表达。
- 可配合GeneCopoeia GeneHero™ sgRNA 克隆、sgRNA文库以及供体克隆服务使用。
图 1. Cas9 核酸酶稳定表达结构的示意图。Cas9 核酸酶基因被装载到到 GeneCopoeia 的人类 AAVS1 safe harbor 敲入克隆载体。该载体的结构配合 GeneCopoeia 的safe harbor 基因敲入技术，能将 Cas9 核酸酶基因敲入到人类第19号染色体上的 AAVS1 位点。单克隆分离通过嘌呤霉素（Puro）药筛实现。
人类基因组 AAVS1 位点上的稳定整合确保了 Cas9 核酸酶基因持续稳定的表达。通过以下的 T7 核酸内切酶 I 错配酶切检测，我们可以看到 在 AAVS1 位点上 的Cas9 核酸酶基因表达量及活性水平都相当高。（图2）
图 2. 稳定表达细胞系活性验证。用靶向 HUWE I 基因的 sgRNA 质粒转染 AAVS1 位点稳定整合 Cas9 核酸酶基因的人类 H1299 细胞系。24 小时后，收集细胞用于取基因组 DNA。使用GeneCopoeia IndelCheck 检测体系扩增sgRNA靶向的序列区，对 PCR 产物进行解链和退火处理，对照组不作处理，实验组用 T7 核酸内切酶进行错配酶切。实验组酶切产物跑胶获得预期的酶切条带，即能证明 Cas9 在这些细胞系中有活性。
