产品简介
AccelerRT® 5G逆转录酶 (RNase H-)是基于MMLV-RT酶通过试管进化（in vitro evolution）而产生的一种新型逆转录酶，该酶具RNA和DNA依赖性的聚合酶活性，而不具有RNase H活性。具有高效模板转换功能，可用于全长cDNA合成。与野生型MMLV RT相比，该工程化酶具有更显著的热稳定性、合成持续性以及合成效率。
点击进入视频讲解：
产品特征
- 不具有RNase H活性
- 具有高效模板转换功能
- 热稳定：反应混合物在37-55℃孵育60分钟后，＞90%活性
- 高灵敏度：较宽的cDNA合成起始总RNA范围（10 pg–5µg）
- 反应速度快：在15-30分钟内完成cDNA合成
- 增加对RT反应抑制剂的抵抗力
- 掺入修饰核苷酸
应用
- 全长mRNA转录本第一链cDNA的合成；
- 单细胞测序文库构建；
- 对于融合基因的发现和检测；
- 生产标记的cDNA探针；
- 通过引物延伸进行RNA分析。
产品性能
模板转换功能原理
图1. Template Switching RT酶模板转换原理介绍。以Oligo(dT) VN Primer为逆转录引物进行第一链cDNA的合成，并且利用逆转录酶的末端脱氧核苷转移酶 (TdT) 活性(Template-switching)，当逆转录酶到达RNA模板的5’端时，TdT活性在cDNA 3’端加上几个不依赖于模版的C碱基。在模板转换步骤，使用Template-switching oligo模板转换引物合成cDNA的第二链，最后，用反向基因特异性引物和正向TSO特异性引物进行PCR扩增以获得全长cDNA产物。
高效TSO接头连接效率（与Thermo Fisher Scientific比较）
使用TSO引物和AccelerRT® 5G逆转录酶进行逆转录反应后，再用TSO引物与ACTB的R特异引物进行PCR扩增；或用ACTB的特异F引物与特异R引物进行PCR扩增。
图2. 使用TSO引物进行AccelerRT® 5G模板转换逆转录反应，所得cDNA分别以TSO引物5’端部分或基因特异上游和下游引物分别进行PCR扩增（A）。PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳（B），通过产物浓度密度值及产物长度计算TSO接头连接效率（表）。
图3. 使用AccelerRT® 5G Template Switching RT Enzyme Mix获得高效模板转换效率。分别以5G Template Switching RTase（PC020）和SuperScript IV RTase（Thermo Fisher #18090050）进行模板转换逆转录反应，所得cDNA分别以TSO引物5′ 端部分或基因特异上游和下游引物分别进行PCR扩增。PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳（C）。
具有宽广的温度稳定性
图4. AccelerRT® 5G逆转录酶具有宽广的温度稳定性。使用AccelerRT® 5G逆转录酶在42~60℃不同温度下，对1ng Hela total RNA进行反转录，随后对不同基因进行qPCR扩增。
灵敏度高
图5. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶，对1pg，10pg，100pg，1ng，10ng，100ng的Hela total RNA进行反转录，随后使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0(Cat.# QP031)进行qPCR扩增。
高效逆转录效率
图6. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶，对1ng的Hela total RNA分别进行10min、15min、30min、60min反转录，随后使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0(Cat.# QP031)进行qPCR扩增。
高效抗抑制性
图7.使用AccelerRT® 5G逆转录酶，在不同抑制剂条件下对Hela total RNA分别反转录，随后使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0(Cat.# QP031)进行qPCR扩增。
有效获得9.2 kb长度cDNA
图8. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶对Hela total RNA进行反转录，然后使用UltraHiPF™ DNA Polymerase Kit(Cat.# PC018)进行PCR扩增。
发现融合基因
图9. 使用AccelerRT® 5G逆转录酶对H2228 total RNA进行反转录，然后使用UltraHiPF™ DNA Polymerase Kit(Cat.# PC018)，所得cDNA分别以TSO引物5’端部分和ALK基因特异反向引物进行半巣氏PCR扩增，得到EML4-ALK(E6;A20)融合类型片段约1.2kb（A）；将图A扩增产物用 EML4 正向引物与ALK反向引物进行扩增验证，得到片段800bp左右（B）。
* IP protected and AccelerRT® 5G Trademark owned by GeneCopoeia, Inc.
