文章标题:
Endogenous retroviruses synthesize heterologous chimeric RNAs to reinforce human early embryo development
文章链接:
www.science.org/doi/10.1126/science.adv5257
期刊:Science
影响因子:45.8
产品引用:复能易锦(GeneCopoeia)为本研究提供EndoFectin™ Max转染试剂(货号:EF013)。该试剂具有多种细胞的广泛通用性,经优化设计,在多种常用细胞系中表现优良,具有较高转染效率。感兴趣的研究人员可以与我们联系。
近期,中国科学家团队在 Science 发表突破性研究,首次揭示了内源性逆转录病毒亚家族 MLT2A1 是人类ZGA的核心驱动力。它通过合成独特的嵌合RNA,构建起一个自我放大的转录网络,从而避免胚胎在8细胞期发生阻滞。文中详细记录了使用 复能易锦(GeneCopoeia) EndoFectin™ 转染试剂 完成的以下三个关键实验。这充分证明了 EndoFectin™ 在干细胞及难转染细胞模型中,具有优异的转染效率和极低的细胞毒性,能够满足顶级期刊对数据质量的严苛要求。
关键实验方法拆解:高效转染助力功能验证
- 实验场景一:功能获得性过表达实验 —— 证明“充分性”
实验目的: 验证MLT2A1嵌合RNA是否能够激活ZGA相关基因。
操作细节:通过体外转录(IVT)制备 MLT2A1 嵌合RNA(dup_161/dup_2477)及对照 GFP mRNA。在人类胚胎干细胞(hESCs)中,使用 EndoFectin™ 转染试剂 将 1.6 μg 的目标RNA高效转入细胞。转染48小时后进行转录组测序。
实验结论: 与对照组相比,过表达 MLT2A1 嵌合RNA 后,hESCs 中 LEUTX、TPRX1 等关键 ZGA 基因表达显著上调。
- 实验场景二:荧光素酶报告系统 —— 解析分子机制
实验目的: 深入探究 MLT2A1 嵌合RNA 是如何精准靶向并激活基因的。
操作细节:将嵌合RNA的 3’端融合序列克隆到荧光素酶基因上游作为启动子。 将构建好的报告质粒与不同的 RNA(完整嵌合RNA、仅5’端、仅3’端)共转染 到 hESCs 中。
实验结论: 只有转染完整的嵌合RNA才能有效激活报告基因,其5’端和3’端部分协同作用、缺一不可。
- 实验场景三:挽救实验—— 排除脱靶效应
实验目的: 验证 ASO 敲低导致的 ZGA 缺陷是否真的由 MLT2A1 缺失引起,排除工具脱靶嫌疑。
操作细节:改造 MLT2A1 序列(截短或点突变),使其成为功能正常但“ASO 无法识别”的 不可靶向版本。 在 8C-like 细胞中,使用 EndoFectin™ 转染试剂 将靶向内源 MLT2A1 的 ASO 与外源 “不可靶向”的嵌合RNA 进行共转染。
实验结论: 引入外源嵌合RNA后,ZGA 基因的表达缺陷得到了显著恢复,强有力地证明了 MLT2A1 调控作用的高度特异性。
顶刊之选:为什么选择 EndoFectin™ Max?
EndoFectin™ Max是基于脂质体转染原理的转染试剂,该试剂具有多种细胞的广泛通用性,经优化设计,在多种常用细胞系中表现优良,具有较高转染效率。在上述发表于 Science 的高难度实验中,无论是递送 长链 mRNA、质粒 DNA 还是 短链 ASO,EndoFectin™ Max 都展现了卓越的性能。
对于干细胞(hESCs)及原代细胞模型研究者而言,EndoFectin™ Max 具备三大核心优势:
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多能适配,一剂多用: 完美支持 DNA / mRNA / siRNA / ASO 等多种核酸分子的共转染(如实验三中的 ASO+RNA 共转),简化实验条件的摸索。
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难转染细胞的克星: 在 hESCs 和 8C-like 细胞中依然保持高转染效率,确保过表达或敲低效果显著。
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极低毒性,呵护细胞: 发育生物学研究对细胞状态要求极高。EndoFectin™ Max 温和的配方最大程度维持了细胞的生理活性,避免因转染毒性导致的非特异性表型干扰。

