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Gateway克隆技术基于已研究的非常清楚的λ噬菌体位点特异重组系统，使用Int (integrase)和 IHF (Integration Host Factor) 催化重组反应， attB和attP位点的重组反应会生成attL和attR位点。 重组反应需要三种蛋白 (IHF、Int和 Xis)的参与。λ噬菌体attP位点和大肠杆菌基因组的attB位点可以发生定点重组，λ噬菌体DNA整合到大肠杆菌的基因组DNA中，两侧产生两个新位点：attL和attR。 上图离体的生物化学过程都基于 Gateway®克隆技术。 |
